Langetermijnfollow-up van Mycoplasma Hyopneumoniae-specifieke immuniteit bij gevaccineerde varkens

Abstract

Mycoplasma hypopnea mobile is de belangrijkste oorzaak van enzoötische pneumonie bij varkens. Om de economische verliezen veroorzaakt door deze ziekte tot een minimum te beperken, wordt algemeen gebruik gemaakt van mobiele vaccinatie tegen M. hypopnea. Het voortbestaan ​​van de door het M. hyopneumoniae-vaccin geïnduceerde immuniteit, vooral celgemedieerde immuniteit, tot het moment van slachten is echter nog niet onderzocht. Daarom kregen op twee commerciële boerderijen 25 varkens (n=50) op een leeftijd van 16 dagen intramusculair een commerciële bacterie toegediend. Elke maand werd de aanwezigheid van M. hyopneumoniae-specifieke serumantilichamen geanalyseerd en de proliferatie van TNF-, IFN- en IL-17A-productie door verschillende T-celsubsets in het bloed werd beoordeeld met behulp van terugroeptests. Op beide bedrijven werd uitgegaan van een natuurlijke infectie met M. hyopneumoniae. De onderzochte varkens bleven echter vrijwel de gehele proef negatief voor M. hyopneumoniae. Seroconversie werd na vaccinatie niet waargenomen en alle varkens werden seronegatief op de leeftijd van twee maanden. De kinetiek van de frequenties van de T-celsubset was op beide bedrijven vergelijkbaar. Mycoplasma hypopneu mobiel-specifieke cytokine-producerende CD4+CD8+ T-cellen werden gevonden in het bloed van varkens van beide bedrijven toen ze één maand oud waren, maar namen aanzienlijk af naarmate ze ouder werden. Aan de andere kant werd T-celproliferatie na in vitro stimulatie van M. hyopneumoniae waargenomen tot het einde van de mestperiode. Bovendien werden er geen verschillen in humorale en celgemedieerde immuunresponsen na vaccinatie met M. hyopneumoniae waargenomen tussen varkens met en zonder maternale antilichamen. Deze studie documenteert de lange termijn door het mobiele vaccin geïnduceerde immuunreacties van M. hypopnea bij mestvarkens onder veldomstandigheden. Verder onderzoek is nodig om de invloed van een natuurlijke infectie op deze reacties te onderzoeken.

cistanche voordelen voor mannen versterken het immuunsysteem

Klik hier om de producten van Cistanche Enhance Immunity te bekijken

【Vraag om meer】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats-app: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Trefwoorden

Mycoplasma hyopneumoniae, varkens, longitudinaal onderzoek, vaccingeïnduceerde immuniteit, celgemedieerde immuniteit

Invoering

Eén van de belangrijkste luchtwegpathogenen bij varkens is Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae). Het is de belangrijkste oorzaak van endemische longontsteking, endemisch aanwezig op de meeste boerderijen, en verantwoordelijk voor aanzienlijke economische verliezen in de varkensproductie wereldwijd [1, 2]. Vaccinatie is de meest gebruikte managementpraktijk om M. hyopneumoniae onder controle te houden, omdat het de klinische symptomen en prestatieverliezen kan minimaliseren en de behandelingskosten kan verlagen [3]. Het doel van vaccinatie tegen M. hyopneumoniae is het opwekken van pathogeenspecifieke immuunreacties die snel en effectief reageren op een natuurlijke M. hyopneumoniae-infectie. De meeste commercieel verkrijgbare M. hyopneumoniae-vaccins voor varkens zijn geregistreerd voor toediening tussen de leeftijd van één tot drie weken [4]. Het begin van de M. hypopnea mobiel-specifieke immuniteit varieert van één tot vier weken en heeft tot doel bescherming te bieden tegen infecties gedurende de volledige mestperiode, tot aan de slacht [4]. Over het geheel genomen veroorzaakt vaccinatie of infectie van varkens de differentiatie van geheugen-B-cellen en CD4+CD8+ T-cellen, waardoor een snelle antilichaam- en celgemedieerde immuunrespons wordt gegarandeerd na een tweede contact met de ziekteverwekker [5] . Vaccinatie tegen M. hyopneumoniae kan resulteren in seroconversie en een toename van M. hyopneumoniae-specifieke antilichamen lokaal in de luchtwegen [6–9]. Bij gevaccineerde dieren werden hogere niveaus van IFN- -producerende lymfocyten waargenomen, samen met een hogere snelheid van lymfocytenproliferatie na in vitro stimulatie van M. hyopneumoniae vergeleken met niet-gevaccineerde dieren [9–11]. Bovendien werden polyfunctionele CD4+CD8− en CD4−CD8+ T-cellen, die INF- en TNF- produceren, gevonden na vaccinatie met M. hyopneumoniae [12]. Het is echter niet helemaal duidelijk hoe lang de door het mobiel specifieke vaccin geïnduceerde immuniteit van M. hypopnea aanhoudt. In de meeste onderzoeken naar de werkzaamheid van vaccins tegen M. hyopneumoniae worden varkens al een paar weken na vaccinatie uitgedaagd om hoesten, immuunparameters, ziekteverwekkers en longlaesies te onderzoeken [13–16]. Wanneer de werkzaamheid op lange termijn werd onderzocht, veelal in veldproeven, werden vaak alleen productieparameters en longlaesies bij de slacht onderzocht en werden immuunparameters niet of slechts slecht onderzocht [17-20]. Voor zover wij weten is de specifieke vaccin-geïnduceerde celgemedieerde immuniteit van M. hyopneumoniae vanaf het moment van vaccinatie tot aan de slacht onder veldomstandigheden nog niet onderzocht. Naast biggenvaccinatie is M. hyopneumoniae-vaccinatie van fokgelten een veelgebruikte acclimatisatiepraktijk [21]. Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke cytokine-producerende CD4+CD8+ en polyfunctionele CD4−CD8− T-cellen zijn aanwezig na vaccinatie van fokdieren [22]. Biggen die colostrum van geïmmuniseerde zeugen zuigen, hebben hoge niveaus van M. hyopneumoniae-specifieke maternale antilichamen (MDA) en celgemedieerde immuniteit in hun bloed, die kunnen aanhouden tot het spenen of zelfs langer [7, 22, 23]. Wanneer biggen worden gevaccineerd tegen M. hyopneumoniae in aanwezigheid van (hoge concentraties) MDA, ontbreekt vaak seroconversie [24-26]. De proliferatierespons van lymfocyten na in vitro stimulatie was echter significant hoger bij met M. hyopneumoniae gevaccineerde biggen vergeleken met niet-gevaccineerde biggen, ongeacht de niveaus van MDA [26]. Hoewel deze auteurs hebben aangetoond dat de celgemedieerde immuniteit werd geprimed na vaccinatie met M. hyopneumoniae in de aanwezigheid van hoge MDA-niveaus, is verdere differentiatie van de T-celsubsets en hun cytokineproductie nodig om beter inzicht te krijgen in deze celgemedieerde immuunreacties. en uiteindelijk de invloed van een natuurlijke infectie op deze reacties. Het doel van de huidige studie was om de humorale en celgemedieerde immuunresponsen na M. hyopneumoniae-vaccinatie bij varkens op twee commerciële boerderijen te onderzoeken. Hiertoe werden serumantilichamen en de proliferatie van en cytokineproductie door verschillende subsets van T-cellen gevolgd vanaf het moment van vaccinatie op een leeftijd van 16 dagen tot aan de slachtleeftijd. De mogelijke invloed van M. hyopneumoniae-specifieke maternale immuniteit op humorale en celgemedieerde vaccinresponsen bij biggen werd ook onderzocht.

voordelen van cistanche-supplementen: verhoging van de immuniteit

materialen en methodes

Beschrijving van de kudde en selectie van dieren

Two commercial farrow-to-finish farms were included in the study based on the willingness of the farmer to participate. On both farms, circulation of M. hyopneumoniae was assumed based on the presence of the pathogen in tracheobronchial swabs (TBS) taken from fattening pigs in the past. Danbred breeding gilts were reared on farm A and purchased on farm B. On-farm A, the breeding gilts were vaccinated once against M. hyopneumoniae four weeks before first insemination with Ingelvac MycoFLEX® (Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany). On-farm B, breeding gilts were vaccinated with Stellamune® Mycoplasma (Elanco, Utrecht, The Netherlands) at six months of age upon arrival at the farm and a second time four weeks later. Furthermore, on-farm B gilts were also booster-vaccinated twice shortly before farrowing. On both farms, sows were not vaccinated against M. hyopneumoniae. Farm A practiced a 5-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. The piglets were vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with an inactivated whole cell J strain-based bacterin (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany), porcine circovirus type 2 (PCV2) (Ingelvac CircoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA, Amer, Spain). Pigs were moved to the fattening unit at 9 weeks of age. Farm B worked in a 4-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. Tey was vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with the same vaccine as in farm A (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and PRRSV (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA). The piglets were moved to the fattening unit at 10 weeks of age. On both farms, five breeding animals (two gilts and three sows of mixed parity) were included in the study. The growing process was monitored by the main investigator and from each litter, five healthy piglets (birth weight>1 kg) werden geselecteerd, in de oren gekerfd en maandelijks gevolgd vanaf de geboorte tot aan de slacht (n=25 biggen/bedrijf). Kruisopfok van de oorgekerfde biggen was niet toegestaan ​​en de varkens kregen gedurende de gehele proef op beide bedrijven geen antibiotica actief tegen M. hyopneumoniae.

cistanche tubulosa-verbetering van het immuunsysteem

Studieontwerp en bemonstering

De studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Faculteit Diergeneeskunde en de Faculteit Bio-ingenieurswetenschappen, Universiteit Gent (goedkeuringsnummer 2020/31). Van de zeugen werd tijdens het kraamproces biest verzameld. Binnen 6 uur na het werpen werden een TBS (zuigkatheter van 60 cm, Medinorm GmbH, Spiesen-Elversberg, Duitsland) en bloed in een steriele serumbuis (gestold bloed) van de zeugen verzameld. Op de leeftijd van twee dagen werd bij de biggen bloed afgenomen in serumbuisjes. Vanaf de leeftijd van één tot zes maanden werd bij de biggen maandelijks bloed afgenomen in steriel serum, EDTA-buisjes (niet-gestold bloed) en een TBS. Op boerderij A werden de varkens geslacht toen ze 177 dagen oud waren, en daarom werd het laatste monster genomen toen ze 5,5 maanden oud waren. Op boerderij B werden de varkens op de leeftijd van 191 dagen naar het slachthuis gestuurd, dus het laatste monster werd genomen op de leeftijd van 6 maanden. Colostrum- en serummonsters werden bewaard bij -20 graad en TBS-monsters bij -80 graad tot verdere analyse. Niet-gestold bloed werd onmiddellijk verwerkt voor celgemedieerde immuniteitsanalyse. Digitale PCR voor M. hyopneumoniae DNA-detectie Om te testen op de aanwezigheid van M. hyopneumoniae werd DNA uit de TBS-monsters geëxtraheerd met behulp van een commerciële kit (DNeasy® Blood & Tissue kit, Qiagen, Venlo, Nederland) en een digitale PCR (dPCR ) protocol gericht op het P102-gen werd uitgevoerd volgens een eerder beschreven protocol [27]. Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke antilichamen Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke antilichamen in serum- en colostrummonsters werden geanalyseerd met behulp van een commerciële indirecte ELISA (M. hyo Ab-test, IDEXX Laboratories Inc., Westbrook, ME, VS) volgens de instructies van de fabrikant. Monsters werden als positief beschouwd als de verhouding monster-positief (S/P) hoger was dan 0,40 en negatief als de S/P-verhouding gelijk was aan of lager dan 0,40.

Productie van T-celcytokines

Uit het verse, niet-gestolde bloed werden mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC's) geïsoleerd met behulp van een Lymphep™-dichtheidsgradiënt (Stemcell Technologies, Van - - couver, Canada). Isolatie, stimulatie en kleuring van de PBMC's werden uitgevoerd zoals eerder beschreven met enkele kleine aanpassingen [22]. Cellen werden gedurende de nacht (20 uur) gestimuleerd met intern gemaakte bacterine van de M. hyopneumoniae J-stam en voor elk dier werden een negatief medium en een positieve Concanavalin A (ConA)-controle opgenomen. Het bacterine van de M. hyopneumoniae J-stam werd gemaakt op basis van het protocol voor de productie van M. hyopneumonia F7.2 C-bacterine [16]. Om de cytokineproductie te onderzoeken, werd Brefeldin A (eBioscience ™, San Diego, CA, VS) aan elk putje toegevoegd gedurende de laatste 4 uur stimulatie om de eiwitsecretie te remmen. Voor extracellulaire kleuring werden de PBMC's geïncubeerd met monoklonale anti-CD3 (kloon PPT3), anti-CD4 (kloon 74-12-4) en anti-CD8 (kloon 11-295-33). Vervolgens overeenkomstige secundaire antilichamen anti-muis IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Cambridge, VK), anti-muis IgG2b FITC (Biolegend, San Diego, CA, VS) en anti-muis IgG2a PE-Cy7 (Abcam, Cambridge, VK) waren toegevoegd. Vervolgens werd een blokkeringsstap met muizen-IgGl (10 µg/ml) uitgevoerd. Na oppervlaktekleuring werden de cellen gefixeerd en gepermeabiliseerd, en werd intracellulaire kleuring voor TNF-, IFN- en IL-17A uitgevoerd [22]. Gegevens werden verkregen met een CytoFLEX-flowcytometer (Beckman Coulter, Bea, CA, VS) en de resultaten werden verder geanalyseerd met CytExpert-software (Beckman Coulter). De poorthiërarchie wordt weergegeven in aanvullend bestand 1.

T-celproliferatietest

Geïsoleerde PBMC's werden in vitro gestimuleerd met intern gemaakte M. hyopneumoniae J-stambacterine om de proliferatie van T-cellen te beoordelen. Het gebruikte protocol werd gedetailleerd beschreven in een eerdere studie [22]. Voor de oppervlaktekleuring werden de cellen eerst geïncubeerd met anti-CD3, anti-CD4 en anti-CD8 monoklonale antilichamen en vervolgens met de overeenkomstige secundaire antilichamen anti-muis IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Cambridge, VK), anti-muis IgG2b. FITC (Biolegend, San Diego, CA, VS) en anti-muis IgG2a AlexaFluor 647 (Biolegend, San Diego, CA, VS) samen met propidiumjodide. Gegevens werden verkregen met een CytoFLEX-flowcytometer en de resultaten werden verder geanalyseerd met CytExpert-software. De poorthiërarchie wordt weergegeven in aanvullend bestand 2.

cistanche tubulosa-verbetering van het immuunsysteem

Gegevensanalyses

Statistical analyses were performed using IBM SPSS® Statistics Version 27 (IBM, Chicago, IL, USA) to compare results within farms. A descriptive analysis was performed for M. hyopneumoniae-specific antibody levels and the frequency of different T cell subsets. Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk tests were used as tests for the normality of the residuals. For normally distributed data, repeated measures analyses of variance were used and post-hoc pairwise comparisons were made with a Bonferroni correction to assess possible differences between successive sampling moments. For not mally distributed data, a non-parametric Friedman test was used together with a Wilcoxon signed rank test with Bonferroni correction to compare the different sampling moments. Descriptive results were given to discuss whether the presence (S/P>{{0}}.40) of afwezigheid (S/P kleiner dan of gelijk aan 0,40) van MDA beïnvloedde de humorale en celgemedieerde immuniteit na vaccinatie van biggen.

Resultaten

Op elk bedrijf werden tijdens de proef vijf varkens uitgesloten vanwege overlijden of verlies van een oormerk. De gegevens van deze varkens zijn tot het laatste correct gedocumenteerde bemonsteringsmoment in de analyse meegenomen.

Aanwezigheid van natuurlijke infectie met M. hyopneumoniae op de bedrijven

Op bedrijf A testten alle TBS-monsters (van zeugen, biggen en vleesvarkens) negatief op de aanwezigheid van M. hyopneumoniae-DNA. Op bedrijf B testten alle TBS-monsters van de zeugen, biggen en vleesvarkens tot de leeftijd van vijf maanden negatief op de aanwezigheid van M. hyopneumoniae-DNA. Op de leeftijd van zes maanden testten vier vleesvarkens positief op M. hyopneumoniae met 300, 7, 22 en 14 M. hyopneumoniae-organismen/μL DNA.

Persistentie van M. hyopneumoniae-specifieke antilichamen bij varkens

Op beide bedrijven hadden vier van de vijf zeugen tijdens het werpen M. hyopneumoniae-specifieke antilichamen in serum en colostrum (Figuur 1A en C). Twee dagen oude biggen die colostrum van die zeugen zogen, hadden M. hyopneumoniae-specifieke maternale antilichamen (MDA aanwezig), terwijl biggen van seronegatieve zeugen ook seronegatief waren (MDA afwezig) (figuren 1B en D). Ondanks vaccinatie op de leeftijd van 16 dagen daalde op beide bedrijven het niveau van M. hyopneumoniae-specifieke antilichamen in het serum van de varkens significant van een leeftijd van twee dagen tot een maand, van een maand tot twee maanden en van twee maanden tot drie maanden oud (Figuur 1E). Tussen de latere bemonsteringsmomenten werden geen significante verschillen waargenomen. Vanaf de leeftijd van twee maanden waren alle varkens, behalve twee op bedrijf A op de leeftijd van vier maanden, M. hyopneumoniae seronegatief. De M. hyopneumoniae-specifieke antilichaamniveaus van biggen met MDA namen in de loop van de tijd af en bereikten op de leeftijd van twee maanden dezelfde niveaus als die bij biggen zonder MDA (Figuur 1F).

Kinetiek van T-cel-subsetfrequenties bij varkens

Tijdens het leven van een varken verandert de frequentie van de verschillende subsets van T-cellen in het bloed als gevolg van de rijping van het immuunsysteem en het contact met micro-organismen [28]. Om de kinetiek van de verschillende T-celsubsets te onderzoeken, werden de bloed-PBMC's van de niet-gestimuleerde mediumcontrole geëvalueerd met behulp van flowcytometrie. Op de leeftijd van één maand was de frequentie (gemiddeld %) van CD4−CD8+ T-cellen 13,6±2,8% en 10,5±3,4% bij varkens van respectievelijk boerderij A en B. Deze frequentie nam op beide bedrijven significant toe op de leeftijd van twee maanden en daalde opnieuw significant op de leeftijd van drie maanden op bedrijf A. Vanaf de leeftijd van drie maanden bleef deze stabiel op bedrijf A, terwijl op bedrijf B opnieuw een significante stijging werd waargenomen op de leeftijd van zes maanden. maanden oud (Figuur 2A). Op beide boerderijen was de frequentie van CD4+CD8− T-cellen het hoogst op de leeftijd van één maand, met 37,5±6,0% (boerderij A) en 42,3±5,9% (boerderij B). Deze frequentie nam aanzienlijk af op de leeftijd van twee maanden. Op bedrijf A stabiliseerde de frequentie zich vanaf twee maanden, terwijl op bedrijf B de daling geleidelijker verliep (Figuur 2B). Op de leeftijd van één maand was de CD4/CD8-verhouding 2,8 (boerderij A) en 4.0 (boerderij B). De verhouding daalde op de leeftijd van twee maanden en bleef onder de 1.0 vanaf de leeftijd van drie maanden op beide bedrijven. De frequentie van CD4-CD8-T-cellen bij één maand oude varkens was respectievelijk 31,1 ± 7,2% en 25,6 ± 5,4% op boerderijen A en B. Op beide bedrijven bleef de frequentie vergelijkbaar op de leeftijd van twee maanden, maar nam daarna aanzienlijk toe om het hoogste niveau te bereiken op de leeftijd van vijf maanden (Figuur 2C). De frequentie van CD4+CD8+ T-cellen was het laagst op de leeftijd van één maand, met respectievelijk 3,3±1,1% en 4,0±1,0% op boerderijen A en B. Deze frequentie nam aanzienlijk toe op de leeftijd van twee maanden. Op bedrijf A bleef het daarna stabiel, terwijl het op bedrijf B geleidelijk verder toenam tot de leeftijd van vier maanden, om vervolgens weer aanzienlijk af te nemen op de leeftijd van vijf maanden (Figuur 2D).

Figuur 1 Aanwezigheid van Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke antilichamen bij zeugen en varkens. A, C

Figuur 2 Maandelijkse frequentie (%) van CD3+ T-celsubsets in bloed van varkens. A

Fig. 3 Persistentie van circulerende prolifererende CD3+ T-cellen bij varkens. A, B

Proliferatie van T-cellen

De door M. hypopnea moniae gestimuleerde PBMC's werden geanalyseerd om het percentage prolifererende T-cellen te onderzoeken. Zoals weergegeven in Figuren 3A en B waren op beide bedrijven op elk monsternamemoment prolifererende CD3+ T-cellen aanwezig in het bloed van varkens na in vitro stimulatie met M. hyopneumoniae bacterine, hoewel de percentages van sommige dieren hoger waren op beide bedrijven. boerderij A. Op boerderij A daalde het percentage prolifererende T-cellen significant op de leeftijd van zes maanden in vergelijking met het percentage op de leeftijd van vijf maanden, terwijl op boerderij B geen significante afname of toename van het percentage prolifererende T-cellen mogelijk was. Worden waargenomen. De CD4−CD8− T-cellen waren de dominante CD3+ T-celsubset die prolifereerde als reactie op M. hyopneumoniae-stimulatie op beide boerderijen, gevolgd door de CD4+CD8− T-celsubset (figuren 3 C en D).

Figuur 4 Circulerende Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke cytokine-producerende CD4+CD8+ T-cellen in het bloed van varkens op beide bedrijven. A

Productie van T-celcytokines

Om een ​​beter inzicht te krijgen in de aanwezigheid en persistentie van M. hyopneumoniae-specifieke T-cellen bij varkens, werd TNF-, IFN- en IL-17een productie door bloed-PBMC's in vitro gestimuleerd met M. hyopneumoniae-bacterine geëvalueerd door flowcytometrie. Zoals weergegeven in Figuur 4 produceerden gestimuleerde CD4+CD8+ T-cellen op beide bedrijven cytokines, wat meer uitgesproken was bij varkens van jongere leeftijd. Het percentage TNF- + CD4+CD8+ T-cellen daalde significant bij varkens op bedrijf A vanaf de leeftijd van één tot twee maanden en vanaf de leeftijd van twee tot drie maanden op bedrijf B. A Er werd een significante daling in IFN- + CD4+CD8+ T-cellen waargenomen vanaf de leeftijd van één tot twee maanden bij varkens op beide bedrijven en vanaf de leeftijd van twee tot drie maanden op bedrijf B. Te het percentage CD4+CD8+ T-cellen die zowel TNF- als IFN- produceerden, daalde significant bij varkens van één tot twee maanden oud op bedrijf A en van twee tot drie maanden op bedrijf B. Na één maand Op oudere leeftijd was het percentage IL-17A+ CD4+CD8+ T-cellen hoger vergeleken met het percentage op de leeftijd van twee maanden, maar dit verschil was niet statistisch significant. De vier dieren op boerderij B die op de leeftijd van zes maanden positief testten op M. hyopneumoniae hadden een vergelijkbare cytokineproductie door CD4+CD8+ T-cellen vergeleken met de M. hyopneumoniae-negatieve dieren. Naast de CD4+CD8+ T-celsubset hebben we ook verschillen waargenomen in cytokineproductie door andere T-celsubsets op bedrijf B. Figuur 5 toont gegevens van duidelijke reacties en significante verschillen in cytokineproductie door de andere subsets van T-cellen die alleen in boerderij B voorkwamen. Voor de overige parameters en op boerderij A werden geen verschillen waargenomen in de cytokineproductie van CD4−CD8+, CD4+CD8− of CD4− CD8− T-cellen. Het percentage TNF- + CD4+CD8− T-cellen nam aanzienlijk toe, terwijl het percentage IFN- + CD4−CD8+ T-cellen aanzienlijk daalde van één tot twee maanden leeftijd. Merk op dat het varken dat op de leeftijd van zes maanden positief was voor M. hyopneumoniae en 7 M. hyopneumoniae-organismen/ µL DNA had, hoge percentages TNF- + CD4+CD8− en IL-17 A+ CD4−CD8+ T-cellen in zijn bloed. De andere M. hyopneumoniae-positieve varkens op de leeftijd van zes maanden hadden vergelijkbare percentages cytokine-producerende T-cellen als de M. hyopneumoniae-negatieve varkens.

Figuur 5 Circulerende Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke cytokine-producerende T-celsubsets in het bloed van varkens op bedrijf B. A

Op ieder bedrijf was M. hyopneumoniae-specifiek MDA aanwezig in het serum van 20 twee dagen oude biggen en afwezig in het serum van vijf biggen, afkomstig van de zeug zonder M. hyopneumoniae-specifieke serumantistoffen. Om te onderzoeken of MDA een invloed had op de M. hyopneumoniae-specifieke vaccin-geïnduceerde celgemedieerde immuniteit, werd onderscheid gemaakt tussen de biggen met en zonder MDA, en werden verschillen tussen de twee groepen onderzocht voor de T-cel subsets waarvoor significante er werden verschillen waargenomen in de cytokineproductie (figuren 6A – E). Op boerderij B was het percentage TNF- + CD4+CD8+ T-cellen doorgaans hoger bij varkens van één maand oud met MDA, vergeleken met varkens van één maand oud varkens zonder MDA. Voor de andere cytokineproducerende CD4+CD8+ T-cellen waren de gemiddelde percentages vergelijkbaar tussen de twee groepen varkens op de leeftijd van één maand, op elk bedrijf. In de loop van de tijd was er een dalende trend in de gemiddelde percentages cytokine-producerende CD4+CD8+ T-cellen in het bloed van varkens, met slechts kleine tot geen verschillen op de leeftijd van zes maanden tussen varkens met en zonder MDA (figuren 6A – C). Hetzelfde werd waargenomen voor IFN- -producerende CD8+ T-cellen in het bloed van varkens op boerderij B (Figuur 6D). Op de leeftijd van één en twee maanden was het gemiddelde percentage TNF- + CD4+CD8− T-cellen op bedrijf B vergelijkbaar voor varkens met of zonder MDA, terwijl op de leeftijd van zes maanden een hoger percentage van TNF- -producerende CD4+CD8− T-cellen werd waargenomen in het bloed van varkens zonder MDA (Figuur 6E).

voordelen van cistanche-supplementen: verhoging van de immuniteit

Discussie

Dit is de eerste studie die inzicht geeft in de langetermijn-M. hyopneumoniae-specifieke vaccin-geïnduceerde immuunreacties bij varkens vanaf de geboorte tot aan de slacht onder veldomstandigheden. Een humorale immuunrespons in serum, beoordeeld met de IDEXX ELISA, was na vaccinatie afwezig, maar celgemedieerde immuunresponsen waren aanwezig. Proliferatie van T-cellen na in vitro stimulatie van M. hyopneumoniae werd waargenomen tot het einde van de mestperiode. Bovendien waren op de leeftijd van één maand, na vaccinatie met M. hyopneumoniae, M. hyopneumoniae-specifieke cytokine-producerende CD4+CD8+ T-cellen, waaronder geheugen-T-cellen, aanwezig, maar deze namen af ​​naarmate de leeftijd vorderde. . Maternale antilichamen leken de humorale en celgemedieerde vaccin-geïnduceerde immuunreacties tijdens het leven van het varken niet te beïnvloeden, behalve de aanwezigheid van TNF- + CD4+CD8+ T-cellen . Om de persistentie en verschillen in immuunrespons bij met M. hyopneumoniae gevaccineerde biggen op bedrijfsniveau te evalueren, hebben we twee commerciële boerderijen geïncludeerd. Hoewel op beide bedrijven werd uitgegaan van de circulatie van M. hyopneumoniae, bleven de onderzochte varkens de hele proef negatief voor M. hyopneumoniae, met uitzondering van vier varkens op bedrijf B aan het einde van de proef, waardoor we de persistentie van de door het vaccin geïnduceerde ziekte konden onderzoeken. immuunreacties zonder de invloed van natuurlijke infecties. De vier M. hyopneumoniae PCR-positieve varkens van zes maanden oud op bedrijf B hadden geen hogere M. hyopneumoniae-specifieke antilichaamniveaus vergeleken met de PCR-negatieve varkens. Op één varken na hadden ze ook geen hogere percentages cytokine-producerende T-cellen in hun bloed na in vitro M. hyopneumoniae-stimulatie. Dit zou verklaard kunnen worden door het feit dat de M. hyopneumoniae-infectie waarschijnlijk kort voor het moment van bemonstering plaatsvond, waardoor het immuunsysteem niet voldoende tijd had om op de infectie te reageren [29-31]. Bij drie van de vier M. hyopneumoniae-positieve varkens was de ziekteverwekkerbelasting in het TBS-monster eveneens vrij laag.

Figuur 6 Gemiddeld percentage van Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke cytokine-producerende T-celsubsets volgens maternale antilichaamniveaus. AC

Serumantilichaamniveaus bij twee dagen oude varkens kwamen overeen met de niveaus van M. hyopneumoniae-specifieke antilichamen in serum en colostrum van zeugen tijdens het werpen, wat de overdracht van M. hyopneumoniae-specifieke maternale immuniteit via colostrum bevestigt [22, 23]. Er werd geen seroconversie waargenomen na vaccinatie met M. hyopneumoniae op de leeftijd van 16 dagen. Integendeel, de niveaus van M. hyopneumoniae-specifieke antilichamen namen in de loop van de tijd af, waarbij alle dieren op de leeftijd van twee maanden seronegatief werden. Het is bekend dat het commerciële M. hyopneumoniae-vaccin dat in dit onderzoek wordt gebruikt, na een enkele toediening een beperkte seroconversie veroorzaakt, wat ook in eerdere onderzoeken werd waargenomen [14, 32, 33]. In een experimenteel onderzoek naar het vaccineren van biggen rond het spenen had 40% van de dieren seroconversie 3 weken na vaccinatie, terwijl in een veldproef slechts 3 van de 40 varkens seroconversie vertoonden 7 weken na vaccinatie [14, 32]. De aanwezigheid (of afwezigheid) van M. hyopneumoniae-specifieke serumantilichamen na vaccinatie komt echter niet overeen met bescherming (of het ontbreken daarvan) tegen infectie [14, 25, 34]. Om de gastheer te beschermen tegen facultatieve intracellulaire en extracellulaire bacteriële pathogenen zoals M. hyopneumoniae, spelen CD4+CD8− T-helpercellen, voornamelijk T1- en T17-cellen, een belangrijke rol. T1-cellen produceren IFN-, dat macrofagen activeert om de ziekteverwekker te doden, terwijl T17-cellen IL-17A produceren om de slijmvliesbarrière te versterken [35-38]. Onlangs is aangetoond dat een laag percentage M. hyopneumoniae-cellen ook intracellulair kan worden aangetroffen, en gezien de cruciale rol van CD4−CD8+ cytotoxische T-cellen bij het beschermen van de gastheer tegen intracellulaire pathogenen, kunnen deze cytotoxische T-cellen kan ook belangrijk zijn om M. hyopneumoniae-infecties onder controle te houden [31, 35, 39]. Om de kinetiek van de verschillende frequenties van de T-celsubsets en het vermogen van deze T-cellen om te prolifereren na in vitro M. hyopneumoniae-stimulatie te onderzoeken, werden PBMC's geïsoleerd uit biggen op beide bedrijven. Het patroon van de frequentie van de T-celsubsets was vergelijkbaar op deze twee bedrijven. Volgens andere onderzoeken is het percentage CD4+CD8− T-cellen hoger dan het percentage CD4−CD8+ T-cellen op jongere leeftijd. Met het ouder worden neemt het percentage CD4+CD8− T-cellen af, terwijl het percentage CD4−CD8+ T-cellen toeneemt, wat in de loop van de tijd resulteert in een afnemende CD4/CD8-verhouding [40–42]. Biggen worden geboren met vrijwel geen CD4+CD8+ T-cellen. Deze cellen nemen toe met de leeftijd wanneer varkens in contact komen met micro-organismen, omdat sommige van deze cellen een pathogeenspecifieke geheugenfunctie hebben [5, 22, 42-44]. Op boerderij A bleef de frequentie van CD4+CD8+ echter vanaf de leeftijd van twee maanden op hetzelfde niveau. Op boerderij B was er, zoals verwacht, een geleidelijke toename tot de leeftijd van vier maanden, hoewel het percentage CD4+CD8+ T-cellen daarna weer afnam. Het vergelijken van T-celsubsets met andere onderzoeken blijft moeilijk omdat de PBMC's in dit onderzoek niet direct na de bloedafname werden gemeten, maar eerst 20 uur werden geïncubeerd voordat het percentage T-celsubpopulaties werd gemeten. Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke proliferatie van CD3+ T-cellen hield aan tot het einde van de mestperiode, wat de aanwezigheid bevestigde van M. hyopneumoniae-specifieke T-cellen in het bloed van varkens die op de leeftijd van 16 dagen waren gevaccineerd. De aanwezigheid van M. hyopneumoniae-specifieke prolifererende T-cellen zou gecorreleerd kunnen zijn met bescherming tegen enzoötische pneumonie, omdat eerder onderzoek aantoonde dat het vermogen van PBMC’s om te prolifereren, na in vitro stimulatie met het mitogeen ConA, gecorreleerd is met de resistentie tegen ziekten bij varkens [45]. ]. De CD4−CD8− T-cellen waren de belangrijkste subset van T-cellen die zich op beide boerderijen prolifereerden, gevolgd door CD4+CD8− T-cellen, waarbij de percentages in de loop van de tijd fluctueerden. Bij varkens dragen de meeste CD4-CD8-T-cellen invariante δ T-celreceptoren in tegenstelling tot antigeen-specifieke T-cellen [31, 42]. Na infectie van varkens met andere pathogenen zoals PRRSV waren δ T-cellen ook de belangrijkste proliferatieve responders na PRRSV-viremie [46]. Die T-cellen spelen ook een rol bij de aanmaak van neutraliserende antilichamen na vaccinatie van varkens tegen klassieke varkenspest [47]. Bovendien werd in bronchoalveolaire spoelvloeistof van varkens geïnfecteerd met Actinobacillus pleuropneumoniae een toename van CD8− δ T-cellen waargenomen [48]. Verder onderzoek is nodig om de rol van δ T-cellen bij de controle en bescherming tegen M. hyopneumoniae-infecties te onderzoeken. In terugroeptests werden verschillende subsets van T-cellen beoordeeld op hun productie van TNF-, IFN- en IL-17A. Op de leeftijd van twee maanden was het percentage TNF- -, IFN- - en TNF-/IFN- -producerende CD4+CD8+ T-cellen aanzienlijk afgenomen vergeleken met de percentages op de leeftijd van één maand. Daarna waren de percentages variabel: ze daalden verder of bleven in de loop van de tijd stabiel. Hetzelfde patroon werd waargenomen voor IL-17CD-4+CD8+ T-cellen, hoewel niet statistisch significant. Bij gelten die tegen PRRSV waren gevaccineerd, werd IFN-productie door PBMCs ook waargenomen tot 42 dagen na de primovaccinatie, maar nam daarna af tot 147 dagen na de vaccinatie [49]. Een verhoogd aantal IFN-uitscheidende lymfocyten na vaccinatie tegen M. hyo pneumoniae is eerder aangetoond [9, 10].

Woestijn levende cistancheTubulosa

De laatste tijd stapelt het bewijs zich op dat polyfunctionele T-cellen, die meer dan één cytokine produceren, een cruciale rol spelen bij de bescherming en klaring van pathogenen. Bij varkens die zijn geïnfecteerd met Chlamydia-soorten zijn polyfunctionele CD4+CD8− T-cellen bijvoorbeeld gecorreleerd met bescherming [50]. Vaccinatie van biggen tegen M. hyo pneumoniae verhoogde ook de percentages polyfunctionele CD4+CD8− en CD4−CD8+ T-cellen [12]. In een ander onderzoek resulteerde vaccinatie van varkens tegen PCV2 in hogere niveaus van TNF- +/IFN- + CD4+CD8+ T-cellen 24 dagen na de vaccinatie, en daalden opnieuw tegen het einde van het onderzoek, 56 dagen na de vaccinatie [51]. In ons onderzoek hebben we ook waargenomen dat de aanwezigheid van cytokineproducerende CD4+CD8+ T-cellen in de loop van de tijd afnam. Deze studie richtte zich op circulerende bloedlymfocyten, maar vaccinatie induceert ook lokale M. hyopneumoniae-specifieke celgemedieerde immuunreacties in de longen en bronchiale lymfeklieren [8]. Daarom zou toekomstig onderzoek naar M. hyo pneumoniae-specifieke vaccingeïnduceerde immuniteit zich ook moeten concentreren op lokale celgemedieerde immuunreacties. Bovendien werd in dit onderzoek slechts één commercieel M. hyopneumoniae-vaccin gebruikt om de biggen te immuniseren. De immuunresponsen kunnen tussen vaccins verschillen, omdat ze worden beïnvloed door de formulering van een vaccin (adjuvans en antigeen) en de toedieningsroute [16, 52, 53]. Van carbopol, het adjuvans in het gebruikte commerciële M. hyopneumoniae-vaccin, is bijvoorbeeld bekend dat het de immuunrespons in de richting van een T1-respons stuurt [54]. Op elk bedrijf waren vijf biggen M. hyopneumoniae seronegatief en in het serum van 20 biggen was M. hyopneu mobiel-specifiek MDA aanwezig. Ongeacht hun MDA-status waren alle varkens op de leeftijd van twee maanden seronegatief voor M. hyopneumoniae, en op latere tijdstippen werd geen seroconversie waargenomen. Onze bevindingen komen overeen met een eerder onderzoek waarin zeven dagen oude biggen met en zonder MDA werden gevaccineerd tegen M. hyopneumoniae [25]. In beide groepen werd geen seroconversie na vaccinatie waargenomen en 42 dagen na vaccinatie waren alle varkens seronegatief. Aan de andere kant vonden anderen dat M. hyopneumoniae-vaccinatie in aanwezigheid van MDA resulteerde in hogere antilichaamniveaus vergeleken met niet-gevaccineerde biggen, maar hoe hoger de titer van MDA, hoe lager de respons [24, 26]. Hoewel er niet altijd een antilichaamreactie wordt waargenomen na vaccinatie met M. hyopneumoniae, worden wel M. hyopneumoniae-specifieke celgemedieerde immuunreacties geïnduceerd [26]. Er werd geen verschil waargenomen in de proliferatie van PBMC’s geïsoleerd uit met M. hyopneumoniae gevaccineerde varkens, ongeacht de MDA-niveaus [26]. In onze studie werden binnen elke boerderij geen verschillen waargenomen in cytokineproducerende T-cellen tussen met M. hyopneumoniae gevaccineerde varkens met en zonder MDA op de leeftijd van één maand. Alleen op bedrijf B hadden biggen met MDA op de leeftijd van één maand de neiging om hogere percentages TNF- + CD4+CD8+ T-cellen te hebben vergeleken met biggen zonder MDA. De relevantie van deze bevindingen moet verder worden onderzocht in een onderzoek met een groter en gelijk aantal biggen met en zonder M. hyopneumoniae-specifieke MDA. Er moeten ook tien statistische analyses worden uitgevoerd, aangezien dit in dit onderzoek niet is gedaan vanwege het lage en ongelijke aantal dieren in de groep zonder en met MDA. Concluderend toonde de huidige studie aan dat, hoewel seroconversie na M. hyopneumoniae-vaccinatie van biggen ontbrak, M. hyopneumoniae-specifieke celgemedieerde immuunresponsen werden gedetecteerd. Polyfunctionele cytokine-producerende CD4+CD8+ T-cellen waren aanwezig tot de leeftijd van drie maanden en prolifererende T-cellen werden waargenomen tot het einde van de vetmestingsperiode, wat wijst op de aanwezigheid van een pathogeen-specifieke celgemedieerde immuniteit bij met M. hyopneumoniae gevaccineerde varkens. De resultaten vormen de basis voor verder onderzoek naar de invloed van een natuurlijke M. hyopneumoniae-infectie op door vaccins geïnduceerde immuniteit onder veldomstandigheden.

Referenties

1. Pieters M, Maes D (2019) Mycoplasmose. In: Zimmermann JJ, Karriker LA, Ramirez A, Schwartz KJ, Stevenson GW, Zhang J (eds) Ziekten van varkens, 11e druk. Wiley, New York

2. Rycroft A (2020) De algemene kenmerken en classificatie van varkens Mycoplasma-soorten. In: Maes D, Sibila M, Pieters M (eds) Mycoplasma's bij varkens. Acco, pp 26–46

3. Maes D, Segalés J, Meyns T, Sibila M, Pieters M, Haesebrouck F (2008) Controle van Mycoplasma hyopneumoniae-infecties bij varkens. Dierenarts Microbiol 126:297–309

4. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2018) Acclimatisatiestrategieën bij gelten om Mycoplasma hyopneumoniae-infectie onder controle te houden. Dierenarts Microbiol 219:23–29 5. Saalmüller A, Werner T, Fachinger V (2002) T-helpercellen van naïef tot toegewijd. Dierenarts Immunol Immunopathol 87: 137–145

6. Ruiz AR, Utrera V, Pijoan C (2003) Effect van Mycoplasma hyopneumoniae zeugenvaccinatie op de kolonisatie van biggen bij het spenen. J Varkensgezondheidsprod. 11: 131–135

7. Sibila M, Bernal R, Torrents D, Riera P, Llopart D, Calsamiglia M, Segalés J (2008) Effect van zeugenvaccinatie tegen Mycoplasma hyopneumoniae op de kolonisatie en seroconversie van zeugen en biggen, en longlaesies bij varkens bij de slacht. Dierenartsmicrobiol 127: 165–170

8. Marchioro SB, Maes D, Flahou B, Pasmans F, Del Pozo Sacristán R, Vranckx K, Melkebeek V, Cox E, Wuyts N, Haesebrouck F (2013) Lokale en systemische immuunreacties bij varkens die intramusculair zijn geïnjecteerd met een geïnactiveerde Mycoplasma hyopneumoniae vaccin. Vaccin 31: 1305–1311

9. Martelli P, Saleri R, Cavalli V, De Angelis E, Ferrari L, Benetti M, Ferrarini G, Merialdi G, Borghetti P (2014) Systemische en lokale immuunrespons bij varkens intradermaal en intramusculair geïnjecteerd met geïnactiveerde Mycoplasma hyopneumoniae-vaccins. Dierenarts Microbiol 168: 357–364

10. Thacker EL, Thacker BJ, Kuhn M, Hawkins PA, Waters WR (2000) Evaluatie van lokale en systemische immuunreacties geïnduceerd door intramusculaire injectie van Mycoplasma hyopneumoniae-bacterine bij varkens. Am J Vet Res 61: 1384–1389

11. Seo HW, Han K, Oh Y, Park C, Choo EJ, Kim SH, Lee BH, Chae C (2013) Vergelijking van celgemedieerde immuniteit geïnduceerd door drie commerciële Mycoplasma hyopneumoniae-bacteriën met een enkele dosis bij varkens. J Vet Med Sci 75: 245–247

12. Matthijs AMF, Auray G, Jakob V, Garcia-Nicolas O, Braun RO, Keller I, Bruggman R, Devriendt B, Boyen F, Guzman CA, Michiels A, Haesebrouck F, Collin N, Barnier-Quer C, Maes D , Summerfield A (2019) Systems emu neologische karakterisering van nieuwe vaccinformuleringen voor Mycoplasma hyopneumoniae-bacteriën. Voor Immunol 10:1087

13. Villarreal I, Meyns T, Dewulf J, Vranckx K, Calus D, Pasmans F, Haesebrouck F, Maes D (2011) Het effect van vaccinatie op de overdracht van Mycoplasma hyopneumoniae bij varkens onder veldomstandigheden. Dierenarts J 188: 48–52

14. Arsenakis I, Panzavolta L, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2016) Werkzaamheid van Mycoplasma hyopneumoniae-vaccinatie vóór en bij het spenen tegen experimentele infectie bij varkens. BMC Dierenartsonderzoek 12:63

15. Park C, Jeong J, Choi K, Chae C (2016) Werkzaamheid van een nieuw bivalent vaccin voor varkenscircovirus type 2 en Mycoplasma hyopneumoniae (Fostera ™ PCV MH) onder experimentele omstandigheden. Vaccin 34: 270–275

16. Matthijs AMF, Auray G, Boyen F, Schoos A, Michiels A, García-Nicolás O, Barut GT, Barnier-Quer C, Jakob V, Collin N, Devriendt B, Summerfield A, Haesebrouck F, Maes D (2019) Werkzaamheid van drie innovatieve bacterinevaccins tegen experimentele infectie met Mycoplasma hyopneumoniae. Dierenartsonderzoek 50:91

17. Reynolds SC, St Aubin LB, Sabbadini LG, Kula J, Vogelaar J, Runnels P, Peters AR (2009) Verminderde longlaesies bij varkens die 25 weken na de toediening van een enkele dosis Mycoplasma hyopneumo niae-vaccin na ongeveer 1 week werden uitgedaagd oud. Dierenarts J 181: 312–320

18. Wilson S, Van Brussel L, Saunders G, Taylor L, Zimmermann L, Heinritzi K, Ritzmann M, Banholzer E, Eddicks M (2012) Vaccinatie van biggen op de leeftijd van 1 week met een geïnactiveerd Mycoplasma hyopneumoniae-vaccin vermindert longlaesies en verbeteraars gemiddelde dagelijkse toename van het lichaamsgewicht. Vaccin 30: 7625-7629

19. Del Pozo Sacristán R, Sierens A, Marchioro SB, Vangroenweghe F, Jourquin J, Labarque, Haesebrouck F, Maes D (2014) Werkzaamheid van vroege Mycoplasma hyopneumoniae-vaccinatie tegen gemengde luchtwegaandoeningen bij oudere mestvarkens. Dierenartsrec. 174:197

20. Cvjetkovíc V, Sipos S, Szabó I, Sipos W (2018) Klinische werkzaamheid van twee vaccinatiestrategieën tegen Mycoplasma hyopneumoniae in een varkensstapel die lijdt aan luchtwegaandoeningen. Porc Health Beheer 4:19

21. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2017) Onderzoek naar de acclimatisatiepraktijken van Mycoplasma hyopneumoniae verguld in Europa. Porc Health Beheer 3:21

22. Biebaut E, Beuckelaere L, Boyen F, Haesebrouck F, Gomez-Duran CO, Devriendt B, Maes D (2021) Overdracht van Mycoplasma hyopneumoniae-specifieke celgemedieerde immuniteit naar neonatale biggen. Dierenartsonderzoek 52:96

23. Bandrick M, Ariza-Nieto C, Baidoo SK, Molitor TW (2014) Colostrale antilichaamgemedieerde en celgemedieerde immuniteit draagt ​​bij aan aangeboren en antigeenspecifieke immuniteit bij biggen. Dev Comp Immunol 43: 114–120

24. Hodgins DC, Shewen PE, Dewey CE (2004) Invloed van leeftijd en maternale antilichamen op de antilichaamrespons van neonatale biggen gevaccineerd tegen Mycoplasma hyopneumoniae. J Varkensgezondheidsprod. 12:10–16

25. Martelli P, Terreni M, Guazzetti S, Cavirani S (2006) Antilichaamreactie op Mycoplasma hyopneumoniae-infectie bij gevaccineerde varkens met of zonder maternale antilichamen geïnduceerd door zeugenvaccinatie. J Vet Med 53: 229–233

26. Bandrick M, Theis K, Molitor TW (2014) Maternale immuniteit verbetert de door vaccinatie geïnduceerde celgemedieerde immuunreacties van Mycoplasma hyopneumoniae bij biggen. BMC Dierenartsonderzoek 10:124

27. Beuckelaere L, Haspeslagh M, Biebaut E, Boyen F, Haesebrouck F, Krejci R, Meyer E, Gleerup D, De Spiegelaere W, Devriendt B, Maes D (2022) Verschillende lokale, aangeboren en adaptieve immuunreacties worden veroorzaakt door twee commerciële Mycoplasma hyopneumoniae-bacteriën en alleen een adjuvans. Voor Immunol 13:1015525

28. Gerner W, Mair KH, Schmidt S (2022) Lokale en systemische T-celimmuniteit bij de bestrijding van virale en bacteriële infecties bij varkens. Annu Rev Anim Biosci 10: 349–372

29. Calsamiglia M, Pijoan C, Bosch GJ (1999) Profilering van Mycoplasma hypopneu mobiel op boerderijen met behulp van serologie en een geneste PCR-techniek. J Varkensgezondheidsproduct 7: 263–268

30. Pieters M, Daniels J, Rovira A (2017) Vergelijking van monstertypen en diagnostische methoden voor in vivo detectie van Mycoplasma hyopneumoniae tijdens vroege stadia van infectie. Dierenartsmicrobiol 203: 103–109

31. Tizard IR (2018) Veterinaire immunologie, 10e editie. Elsevier, St.Louis, Missouri

32. Arsenakis I, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2017) Mycoplasma hyopneumoniae vaccinatie bij of kort voor het spenen onder veldomstandigheden: een gerandomiseerde werkzaamheidsstudie. Dierenartsrec 181:19

33. Betlach AM, Fano E, Vanderwaal K, Pieters M (2021) Effect van meerdere vaccinaties op de overdracht en mate van Mycoplasma hyopneumoniae-infectie bij gelten. Vaccin 39: 767–774

34. Martínez-Boixaderas N, Garza-Moreno L, Sibila M, Segalés J (2022) Impact van maternale immuniteit op immuunreacties opgewekt door vroege vaccinatie van biggen tegen de meest voorkomende pathogenen die betrokken zijn bij het ademhalingsziektecomplex bij varkens. Porc Health Beheer 8:11

35. Schroder K, Hertzog PJ, Ravasi T, Hume DA (2004) Interferon-: een overzicht van signalen, mechanismen en functies. J Leukoc Biol 75: 163–189

36. Dobbs NA, Odeh AN, Sun X, Simecka JW (2009) De veelzijdige rol van T-cel-gemedieerde immuniteit in de pathogenese en resistentie tegen Mycoplasma-luchtwegaandoeningen. Huidige trends Immunol 10:1–19

37. Ge Y, Huang M, Yao Y (2020) Biologie van interleukine -17 en de pathofysiologische betekenis ervan bij sepsis. Voor Immunol 11:1558

38. Summerfeld A (2020) Immuunreacties tegen Mycoplasma-infecties bij varkens. In: Maes D, Sibila M, Pieters M (eds) Mycoplasma's bij varkens. Acco, pp 110–125

39. Raymond BBA, Turnbull L, Jenkins C, Madhkoor R, Schleicher I, Uphof CC, Whitchurch CB, Rohde M, Djordjevic SP (2018) Mycoplasma hyopneumoniae bevindt zich intracellulair in epitheelcellen van varkens. Sci Rep 8:17697

40. Borghetti P, De Angelis E, Saleri R, Cavalli V, Cacchioli A, Corradi A, Mocchegiani E, Martelli P (2006) Perifere T-lymfocytenveranderingen bij neonatale biggen: relatie met groeihormoon (GH), prolactine (PRL) en cortisol verandert. Dierenarts Immunol Immunopathol 110:17–25

41. Brown DC, Maxwell CV, Erf GF, Davis ME, Singh S, Johnson ZB (2006) Ontogenie van T-lymfocyten en darmmorfologische kenmerken bij neonatale varkens op verschillende leeftijden in de postnatale periode. J Anim Sci 84: 567–578

42. Stepanova H, Samankova P, Leva L, Sinkora J, Faldyna M (2007) Vroege postnatale ontwikkeling van het immuunsysteem bij biggen: de herverdeling van subsets van T-lymfocyten. Celimmunol 249:73–79

43. Hernández J, Garfas Y, Nieto A, Mercado C, Montaño LF, Zenteno E (2001) Vergelijkende evaluatie van de CD4 + CD8 + en CD4 + CD{{5} } lymfocyten in de immuunrespons op varkensrubulavirus. Dierenarts Immunol Immunopathol 79: 249–259

44. Blanc F, Prévost-Blondel A, Piton G, Bouguyon E, Leplat J, Adréoletti F, Egidy G, Bourneuf E, Bertho N, Vincent-Naulleau S (2020) De samenstelling van circulerende leukocyten varieert met de leeftijd en het begin van het melanoom het MeLiM varkensbiomedische model. Voor Immunol 11:291

45. Jeon RL, Gilbert C, Cheng J, Putz AM, Dyck MK, Plastow GS, Fortin F, Canada P, Dekkers JC, Harding JCS (2021) Proliferatie van mononucleaire cellen uit perifeer bloed van gezonde biggen na mitogeenstimulatie als indicatoren van ziekte weerstand. J Anim Sci 99:skab084

46. ​​Kick AR, Amaral AF, Cortes LM, Fogle JE, Crisci E, Almond GW, Käser T (2019) De T-celreactie op type 2 varkensreproductief en respiratoir syndroomvirus (PRRSV). Virussen 11:796

47. Petersen B, Kammerer R, Frenzel A, Hassel P, Dau TH, Becker R, Breithaupt A, Ulrich RG, Lucas-Hahn A, Meyers G (2021) Generatie en eerste karakterisering van TRDC-knock-out varkens zonder δT-cellen. Sci Rep 11:14965

48. Faldyna M, Nechvatalova K, Sinkora J, Knotigova P, Leva L, Krejci J, Toman M (2005) Experimentele Actinobacillus pleuropneumoniae-infectie bij biggen met verschillende soorten en niveaus van specifieke bescherming: immuungenotypische analyse van lymfocytsubsets in de bloedsomloop en het respiratoire mucosale lymfoïde weefsel. Dierenarts Immunol Immunopathol 107: 143–152

49. Sánchez-Matamoros A, Camprodon A, Maldonado J, Pedrazuela R, Miranda J (2019) Veiligheid en langdurige immuniteit van de gecombineerde toediening van een gemodificeerd levend virusvaccin tegen varkensreproductief en ademhalingssyndroomvirus 1 en een geïnactiveerd vaccin tegen varkensparvovirus en Erysipelothrix rhusiopathiae bij fokgelten. Porc Health Beheer 5:11

50. Käser T, Pasternak JA, Delgado-Ortega M, Hamonic G, Lai K, Erickson J, Walker S, Dillon JR, Gerdts V, Mearens F (2017) Chlamydia suis en Chlamydia trachomatis induceren multifunctionele CD4 T-cellen bij varkens. Vaccin 35: 91–100

51. Koinig HC, Talker SC, Stadler M, Ladinig A, Graage R, Ritzmann M, Hennig Pauka I, Gerner W, Saalmüller A (2015) PCV2-vaccinatie induceert IFN-/TNF-coproducerende T-cellen met een potentiële rol in bescherming. Dierenartsonderzoek 46:20

52. Xiong Q, Wei Y, Xie H, Feng Z, Gan Y, Wang C, Liu M, Bai F, Xie F, Shao G (2014) Effect van verschillende adjuvansformuleringen op de immunogeniciteit en het beschermende effect van een levend Mycoplasma hyopneumoniae vaccin na intramusculaire inenting. Vaccin 32: 3445–3451

53. Maes D, Boyen F, Devriendt B, Kuhnert P, Summerfield A, Haesebrouck F (2021) Perspectieven voor verbetering van Mycoplasma hyopneumoniae-vaccins bij varkens. Dierenartsonderzoek 52:67

54. Gartlan KH, Krashias G, Wegmann F, Hillson WR, Scherer EM, Greenberg PD, Eisenbarth SC, Moghaddam AE, Sattentau QJ (2016) Steriele ontsteking geïnduceerd door Carbopol wekt robuuste adaptieve immuunreacties op bij afwezigheid van pathogeen-geassocieerde moleculaire patronen . Vaccin 34: 2188–2196