Nieuwe fenylethanoïde glycosiden van Cistanche Tubulosa (SCHRENK) HAAK. FI

HIROMI KOBAYASHI. HIROKO OGUCHI, NOBUO TAKIZAWA, TOSHIO MIYASE, AKIRA UENO, KHAN USMANGHANI en MANSOOR AHMAD

Central Research Laboratories, Yomeishu Seizo Co., Ltd., 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Japan, Shizuoka College of Pharmacy,2-2-1 Oshika, Shizuoka- shi 422, Japan en afdeling Farmacognosie, Faculteit Farmacie, Universiteit van Karachi, c Karachi-32, Pakistan

Contact:joanna.jia@wecistanche.com

Abstract

vier nieuwefenylethanoïdeglycosiden, tubulosiden A (II), B (VI), C (VII) en D (VIII), zijn geïsoleerd uitCistanchetubulosa(SCHRENK) HAAK. f. (Orobanchaceae), samen met vier bekendefenylethanoïdeglycosiden, echinacoside (I), acteoside (III), acteoside-isomeer (IV) en 2'-acetylacteoside (V). De structuren van II, VI, VII en VIII zijn vastgesteld op basis van chemisch bewijs en spectrale gegevens. Verbindingen VII en VIII bezitten een triacetylrhamnosylgroep als de eindsuiker.

Cistanchefenylethanoïde glycosideHebben veel gezondheidsvoordelen

trefwoorden:Cistanchetubulosa; Orobanchaceae; parasitaire plant;fenylethanoïde glycoside; tubuloside A; tubuloside B; tubuloside C; tubuloside D

In onze reeks onderzoeken naar de chemische bestanddelen van Cistanche spp. (Orobanchaceae), defenylethanoïdeglycosiden1-3) en iridoide4) van Cistanche salsa (CA MEY.) G. BECK is gemeld. Dit artikel gaat over de fenylethanoïde glycosiden van Cistanche tubulosa (SCHRENK) HOOK. f. verzameld in Pakistan. Cistanche tubulosa (SCHRENK) HAAK. f.5) is een parasitaire plant die groeit op de wortels van Salvadora en Calotropis spp., en komt veel voor in Noord-Afrika, Arabië, West-Azië tot Pakistan en India. De hele plant wordt in Pakistan medicinaal gebruikt als middel tegen diarree en zweren.6)

We willen nu de isolatie van vier nieuwefenylethanoïdeglycosiden, genaamd tubulosiden A (II), B (VI), C (VII) en D (VIII), evenals vier bekende fenylethanoïde glycosiden, echinacoside (I), acteoside (III), acteoside-isomeer (IV) en 2' -acetylacteoside (V). De structuren van deze verbindingen werden bepaald op basis van chemisch bewijs en spectroscopische studies.

FenylethaanGlycosidenincistanchekan ontstekingsremmend zijn

Het ethanolische extract van de hele plant werd in water gesuspendeerd. Deze suspensie werd geëxtraheerd met ethylacetaat en daarna met n-butanol verzadigd met water. De in n-butanol oplosbare fractie werd gechromatografeerd op polyamide- en silicagelkolommen en achtereenvolgens onderworpen aan hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC), om achtfenylethanoïdeglycosiden(I-VIII).

Verbindingen I, III, IV en V werden geïsoleerd als amorfe poeders, die vergelijkbare spectra vertoonden als die van respectievelijk echinacoside, 1) acteoside, 1) acteoside-isomeer7) en 2'-acetylacteoside, 2) en werden geïdentificeerd door directe vergelijking met authentieke monsters [dunnelaagchromatografie (TLC), infrarood (IR), proton kernmagnetische resonantie (1H-NMR) en koolstof-13 kernmagnetische resonantie (13C-NMR) spectra].

Tubuloside A (II) werd geïsoleerd als een amorf poeder, [ƒ¿]D{{0}},7•‹ (MeOH), C37H48O21.3/2 H20. Het IR-spectrum suggereerde de aanwezigheid van hydroxylgroepen (3440 cm-1), een geconjugeerde ester (1705 cm-1), een dubbele binding (1634 cm-1) en aromatische ringen (1608, 1522 cm-1), en het ultraviolet (UV) spectrum vertoonde absorptiemaxima bij 220, 250 sh, 292 sh en 334 nm. Het 1H-NMR-spectrum van II toonde signalen van een methylgroep van rhamnose [6 1.07 (3H, d, J= 6 Hz)], een methylsignaal van een acetoxylgroep [{{27} }.98 (3H, s)], benzylische methyleenprotonen [6 2.70 (2H, t, J= 7 Hz)], twee glucose-anomere protonen [6 4.32, 4,54 (1H elk, d, J= 8 Hz)], een rhamnose-anomeer proton [6 5.11 (1H, br s)], twee trans-olefinische protonen [6 6.25 , 7,64 (1H elk, d, J= 16 Hz)] en aromatische protonen [6 6.5 7 .2 (6H)]. Bij acetylering leverde II het onderacetaat (IIa) op, dat identiek was aan het dodecaacetaat van echinacoside (I). Het 13C-NMR-spectrum van II was bijna identiek aan dat van I, behalve de signalen vanwege de glucose die direct aan het aglycon en de acetoxylgroep is gebonden [6 20.9 (CH3), 171.5 (C {{62 }})], wat suggereert dat de acetoxylgroep aan de glucosegroep is gehecht. In het 13C-NMR-spectrum van II verschuift de acylatie81 [-2.3 (C-1),-0.9 (C-2) en-1 .0 (C-3)] werden waargenomen bij C-1, C-2 en C-3 van de binnenste glucose door gedetailleerde vergelijking met het spectrum van I, wat aangeeft dat de acetoxylgroep is gekoppeld aan de C-2 hydroxylgroep van de glucosegroep in II. Bij methanolyse van II met acetylchloride in methanol, methylcaffeaat en 3 werden 4-dihydroxyfenethylalcohol gedetecteerd met TLC en HPLC. Zure hydrolyse van II met 10% zwavelzuur leverde glucose en rhamnose op in een verhouding van 2 tot 1.

Op basis van het bovengenoemde bewijsmateriaal werd vastgesteld dat de structuur van tubuloside A 2-(3,4-dihydroxyfenyl)ethyl 0-aL-rhamnopyranosyl-(1•¨3)- is. [ƒÀ-D-glucopyranosyl-(1-6)]-(4-O-caffeoy1)-2-O-acetyl-fl-D-glucopyranoside (II).

Tubuloside B (VI) werd geïsoleerd als een amorf poeder, [a]D,{{0}},0•‹ (MeOH), C31 H38016, waarvan het 1H-NMR-spectrum de aanwezigheid van een alifatische acetoxylgroep liet zien [6 1,98 (3H, s)]. Het 13C-NMR-spectrum van VI leek sterk op dat van acteoside-isomeer (IV), maar verschilde enigszins in de signalen vanwege de glucosegroep en de aanwezigheid van de acetoxylgroep [6 20.9 (CH3), 171.6 ( C =0)]. De locatie van de acetoxylgroep in de glucosegroep van VI werd bepaald uit zijn 13C-NMR-spectrum door gedetailleerde vergelijking met die van IV.

De signalen van C{{0}}, C-2 en C-3 van de glucosegroep vertoonden acyleringsverschuivingen (-2.5 (C-1 ),－0 .6 (C-2) ​​en-1.4 (C-3)], zoals in het geval van II, wat aangeeft dat de acetoxygroep is gekoppeld aan de C{ {12}} hydroxylgroep van de glucosegroep in VI. Bij acetylering leverde VI het octaacetaat (VIa) op dat identiek was aan het niet-acetaat van IV. Bij methanolyse van VI met acetylchloride in methanol, methylcaffeaat en 3,{{ 14}}dihydroxyfenethylalcohol werd gedetecteerd met TLC en HPLC Zure hydrolyse van VI met 10% zwavelzuur leverde glucose en rhamnose op in een verhouding van 1 op 1. Deze resultaten brachten ons tot de conclusie dat de structuur van tubuloside B {{18} is }(3,4-dihydroxyfenyl)ethyl 0-aL-rhamnopyranosyl-(1-3)-(6-0-caffeoy1)- 2-0-acety143-D -glucopyranoside (VI).

Het actieve ingrediënt vanCistancheheeft eenanti-kankereffect

Tubuloside C (VII) werd geïsoleerd als een amorf poeder, [a],-104.8•‹ (MeOH), C43H54024 H20, waarvan het 1H-NMR-spectrum de aanwezigheid van vier alifatische acetoxylgroepen liet zien [{{7} }.80, 1.92, 1.95 en 2.08 (3H elk, s)]. Het "C-NMR-spectrum van VII was bijna identiek aan dat van tubuloside A (II), dat een alifatische acetoxylgroep in de binnenste glucose bezit, behalve de signalen als gevolg van de rhamnose-eenheid. Bovendien, in het 13C NMR-spectrum van VII , acyleringsverschuivingen') werden waargenomen in de signalen als gevolg van C-2, C-3 en C-4 van de rhamnose-eenheid door gedetailleerde vergelijking met de gegevens voor II. van de vier acetoxylgroepen werd bepaald dat het C-2 van de binnenste glucose en C-2, C-3, C-4 van het rhamnosegedeelte in VII was. VII leverde het octaacetaat op dat identiek was aan tubuloside A onder acetaat (IIa). Bij methanolyse van VII met acetylchloride in methanol, methylcaffeaat en 3 werden 4-dihydroxyfenethylalcohol gedetecteerd met TLC en HPLC. Zure hydrolyse van VII met 10 procent zwavelzuur leverde glucose en rhamnose op in een verhouding van 2 tot 1.

Uit de bovenstaande resultaten bleek dat de structuur van tubuloside C 2-(3,4- dihydroxyfenyl)ethyl 2,3,4-tri-O-acetyl-aL-thamnopyranosyl- (1 - plus 3)-[/9-D-glucopyranosyl-(1 - plus 6)]-(4-0-caffeoy1)-2-0-acetyl-fl-D -glucopyranoside (VII).

Tubuloside D (VIII) werd geïsoleerd als een amorf poeder, [oc],-91,4 graden (MeOH), C43H54023. H2O, waarvan het 1H-NMR-spectrum de aanwezigheid aantoonde van vier alifatische acetoxylgroepen [6 1.81, 1.93, 1.96 en 2.09 (3H elk, s)]. Bij acetylering leverde VIII het heptaacetaat (VIIa) op, waarvan het 1H-NMR-spectrum acht alifatische verbindingen vertoonde [6 1.87, 1.94, 1.96, 1.99, 2.10 (3H elk, s) en 2.02 (9H, s)] en drie aromaten [6 2.27, 2.30 en 2.32 (3H elk, s)] acetoxylmethylsignalen. Het 13C-NMR-spectrum van VIII was bijna identiek aan dat van tubuloside C (VII), behalve de signalen vanwege de p-coumarinezuurgroep. Bij methanolyse van VIII met acetylchloride in methanol werden methyl-p-coumaraat en 3,4-dihydroxyfenethylalcohol gedetecteerd met TLC en HPLC. Zure hydrolyse van VIII met 10% zwavelzuur leverde glucose en rhamnose op in een verhouding van 2 tot 1.

Op basis van deze resultaten werd vastgesteld dat de structuur van tubuloside D 2-(3,4- dihydroxyfenyl)ethyl 2,3,4-tri-O-acetyl-a-Lrhamnopyranosyl- (1•¨3)-[ƒÀ-D-glucopyranosy-](1→6)} (4-0-p-coumary1)-2-0-acetyl-fl-D-glucopyranoside (VIII).

Veelfenylethanoïdeglycosidenzoals forsythoside A,' graad ) leucosceptoside A, 7 isomar tynosidell) enzovoort, met een rhamnose-eenheid als de eindsuiker is gerapporteerd. In deze gevallen is de rhamnose-eenheid niet geacetyleerd. Tubulosiden C (VII) en D (VIII) bevatten een geacetyleerde rhamnose-eenheid en zijn de eerste natuurlijk voorkomende verbindingen met een tri-acetyl-rhamnose-eenheid die worden vermeld.

Het actieve ingrediënt vanCistancheheeftneuroprotectiefeffect

Experimenteel

Smeltpunten werden bepaald op een Mitamura microsmeltpuntapparaat en zijn niet gecorrigeerd. Optische rotaties werden gemeten met een JASCO DIP-140 digitale polarimeter. IR-spectra werden opgenomen met Hitachi 270-30 infrarood spectrofotometer en UV-spectra met een Hitachi 200-20 spectrometer. ' H-NMR en "CN MR-spectra werden opgenomen met een JEOL FX-90Q-machine (respectievelijk 89,55 en 22,5 MHz). Chemische verschuivingen worden gegeven op de 6 (ppm) schaal met tetramethylsilaan (TMS) als interne standaard (s, singlet; d, doublet; t, triplet; br, breed). Gas-vloeistofchromatografie (GC) werd uitgevoerd op een Shimadzu GC-4CM-apparaat met een vlamionisatiedetector. HPLC werd uitgevoerd op een Machine Hitachi 655A-11. Silicagel (Wako gel C-300, Wako Pure Chemical) werd gebruikt voor kolomchromatografie. Voorgecoate platen met Kieselgel 60 F254 (Merck) werden gebruikt voor TLC en detectie werd uitgevoerd door sproeien 10 procent H2SO4 gevolgd door verwarming.

Isolatie

Verse hele planten van C. tubulosa (22 kg), verzameld in december 1984, in Karachi, Pakistan, werden geëxtraheerd met EtOH. Het ethanolische extract werd gesuspendeerd in H20 en geëxtraheerd met EtOAc en vervolgens met n-BuOH verzadigd met H20. Het n-BuOH-extract (99,1 g) werd geabsorbeerd op een Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.)-kolom en de hars werd geëlueerd met Me0H na te zijn gewassen met H20 . Het Me0H-eluaat (15,4 g) werd gechromatografeerd op een polyamide C-200 (Wako Pure Chemical)-kolom met H20 en vervolgens Me0H. De met Me{{50}}H geëlueerde fractie werd geconcentreerd om een ​​residu op te leveren (fenolische ruwe glycosiden) (8,0 g). Na herhaalde chromatografie van het residu op silicagel met CHC13-Me0H-H20 (70: 30: 5) en HPLC met een H2O-CH3CN of H2O-MeOH oplosmiddelsysteem, werden acht glycosiden (I---VIII) geïsoleerd. ik, 230 mg; II, 200 mg; III, 240 mg; IV, 60 mg; V, 210 mg; VI, 100 mg; VII, 60 mg; VIII, 65 mg. Voorwaarden voor HPLC: kolom, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); oplosmiddel, I, II (17 procent CH3CN), III, IV (20 procent CH3CN), V (22 procent CH3CN), VI (25% CH3CN), VII (53 procent Me0H), VIII (55 procent Me0H); detector (UV), 220 nm; stroomsnelheid, 6,9 ml/min.

Echinacoside (I)

Amorf poeder. IR 0,;,Eas,r, cm-1: 3400, 1690, 1625, 1600, 1518. 11-I-NMR (methanol-d4) 6: 1,09 (3H, d , J=6 Hz, CH3 van rhamnose), 2,79 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,29, 4,37 (1H elk, d, J{{ 28}} Hz, H-1 glucose), 5,16 (1H, d, J=1 Hz, H-1 van rhamnose), 6,26 (1H, d, J{{38} } Hz, Ar-CH=CH-), 6.4-7.1 (6H, aromatisch H), 7.59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH{{ 51}}CH-). 13C-NMR: Tabel I.

Tubuloside A (H)

Amorf poeder, [a]{{0}}.7 (c=1.08, Me0H). Anaal. berekend voor C371-14021 3/2 H20: C, 51,93; H, 6.01. Gevonden: C, 51,80; H, 5.81. IR vrtr, cm': 3440, 1732, 1705, 1634, 1608, 1522. UV An?" nm (log e): 220 (4,14), 250 sh (3,85), 292 sh (3,95), 334 (4,13). 1H-NMR (methanol-d4): zie tekst 13C-NMR: Tabel I.

Acteoside (III)

Amorf poeder. IR v cm-1: 3420, 1696, 1634, 1606, 1520. 1H-NMR (methanol-d4) 5: 1,10 (3H, d, J=6 Hz, CH3 van rhamnose), 2,78 ( 2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,36 (1H, d, J= 8 Hz, H-1 van glucose), 5,17 (1H, d, J=1 Hz, H-1 van rhamnose), 6,25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.{{ 40}}.1 (6H, aromatisch H), 7,58 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Tabel I.

Acteoside-isomeer (IV)

Amorf poeder. IR v cm-1: 3280, 1686, 1624, 1602, 1512. 11-I-NMR (methanol-d4) 6: 1,26 (3H, d, J=6 Hz, CH3 van rhamnose), 2,77 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-Cl.2-I.2 4,33 (3H, d, J=8 Hz, H{ {26}} glucose), 5,18 (1H, br s, H-1 rhamnose), 6,28 (1H, d, 1=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.4-7.1 (6H, aromatisch H), 7,54 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-).13C-NMR: Tabel I.

2'-Acetylacteoside (V)

Amorf poeder. IR vT cm-1: 3450, 1735, 1705, 1640, 1610, 1535. 1H-NMR (methanol-d4) 6: 1,07 (3H, d, 1= 6 Hz, CH3 van rhamnose), 1,99 (3H, s, OAc), 2,69 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,50 (1H, d, J=8 Hz, H{{30 }} glucose), 5,16 (1H, br s, H-1 van rhamnose), 6,25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6 .5-7.2 (6H, aromatisch H), 7,59 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Tabel I.

Tubuloside B (VI)

Amorf poeder, [{{0}}.0 graad (c= 1.05, Me0H). Anaal. berekend voor CmH38016: C, 55,85; H, 5.75. Gevonden: C, 55,91; H, 6.00. IR v:,111 cm-1: 3420, 1734, 1696, 1634, 1608, 1522. UV 4ear nm (log e): 220 (4,32), 246 sh (4,09), 292 sh (4,21), 340 (4.31). 1H-NMR (methanol-d4) 6: 1,24 (3H, d, J=6 Hz, CH3 van rhamnose), 1,98 (3H, s, OAc), 2,69 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,48 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glucose), 6,32 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH - CH-), 6.5-7.2 (6H, aromatisch H), 7.61 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Tabel I.

Tubuloside C (VII)

Amorf poeder, [a] - iO4.8© (c=1.86, Me0H). Anaal. berekend voor C43H54024'H20: C, 53,08; H, 5,80. Gevonden: C, 53,28; H, 5,68. IR v cm': 3440, 1748, 1634, 1608, 1522. UV 2" nm (log c): 220 sh (4,06), 250 sh (3,7), 292 sh (3,88), 333 (4,04). 1H-NMR (methanol-d4) 6: 1,02 (3H, d, J=6 Hz, CH3 van rhamnose), 1,80, 1,92, 1,95, 2,08 (3H elk, s, OAc), 2,70 (2H, t, J{ {57}} Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,56 (1H elk, d, J=8 Hz, H-1 glucose), 5,02 (1H, br s, H-1 van rhamnose), 6.30 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.5-7.2 (6H, aromatisch H ), 7,66 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-).13C-NMR: Tabel I.

Tubuloside D (VIII)

Amorf poeder, [a]P{{0}},4 graden (c= 1,85, Me0H). Anaal. berekend voor C43H54023'H20: C, 54.00; H, 5,90. Gevonden: C, 54,10; H, 5.75. IR v:,111 cm-1: 3440, 1750, 1634, 1608, 1518. UV 2,',1,2" nm (log a): 228 (4,16), 292 sh (4,21), 302 sh (4,26), 318 (4.35) 11-I-NMR (methanol-d4) 6: 1.00 (3H, d, J=6 Hz, CH3 van rhamnose), 1,81 , 1,93, 1,96, 2,09 (3H elk, s, OAc), 2,70 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,53 (1H elk, d, J{ {68}} Hz, H-1 glucose), 5,03 (1H, br s, H-1 rhamnose), 6,38 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.52-6.75 (3H, aromatisch H), 6.84 (2H, d, J= 9 Hz, H-3, H{{90 }} p-coumarinezuur), 7,54 (2H, d, J=9 Hz, H-2, H-6 p-coumarinezuur), 7,74 (1H, d, J =16 Hz, Ar-CH =CH-) 13C-NMR: Tabel I.

Acetylering van II en VII

Behandeling van II of VII (30 mg) met Ac20 (1 ml) en pyridine (1 ml) bij kamertemperatuur gedurende de nacht gevolgd door de gebruikelijke opwerking leverde een ruw acetaat op, dat werd gezuiverd door chromatografie op silicagel met benzeen-aceton (5: 1) om het onderacetaat (IIa) (25 mg) van II of het octaacetaat (22 mg) van VII te geven, als kleurloze naalden van Me0H, mp 130-131 C. IR v cm ': 1775, 1660, 1523, 1450. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,05 (3H, d, J= 6 Hz, CH3 van rhamnose), 1,89, 1,96, 1,97, 2,01, 2,11 (elk 3H, s, OAc), 2,03 (9H, s, OAc x 3), 2,29 (3H, s, Ar-OAc), 2,31 (9H, s, Ar-OAc x 3), 2,88 (2H, t, J{{52 }} Hz, Ar-CH2-), 6.35 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH=CH-), 7.0-7.4 ( 6H, aromatisch H), 7,66 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). Deze producten bleken identiek te zijn aan het dodecaacetaat van echinacoside (I) door directe vergelijking (TLC, gemengde mp, IR en 1H-NMR).

Acetylering van VI

Verbinding VI (40 mg) werd op dezelfde manier geacetyleerd als beschreven voor II en het reactieproduct werd gezuiverd door chromatografie over silicagel met benzeen-aceton (9: 1) om het octaacetaat (VIa) (30 mg) als een amorf poeder. IR v cm': 1742, 1630, 1498. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,14 (3H, d, J=6 Hz, CH3 van rhamnose), 1,95, 2,03, 2,05, 2,09, 2,13 (3H elk , s, OAc), 2,27, 2,31 (elk 6H, s, Ar-OAc x 2), 2,87 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 6,42 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6.9-7.5 (6H, aromatisch H), 7.64 (1H, d, J= 16 Hz, Ar CH=CH-). VIa bleek identiek te zijn met het niet-acetaat van acteoside-isomeer (IV) door directe vergelijking (TLC, IR en 11-1-NMR.

Acetylering van VIII

Verbinding VIII (35 mg) werd op dezelfde manier geacetyleerd als beschreven voor II om het heptaacetaat (VIIIa) (30 mg) als een amorf poeder te geven. IR v cm': 1760, 1638, 1604, 1510. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,03 (3H; d, J= 6 Hz, CH3 van rhamnose), 1,87, 1,94, 1,96, 1,99, 2,10 ( 3H elk, s, OAc), 2,02 (9H, s, OAc x 3), 2,27, 2,30, 2,32 (3H elk, s, Ar-OAc), 2,88 (2H, t, J=7 Hz, Ar -CH2-), 6.36 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 7.0-7.2(3H, aromatisch H) , 7,25 (2H, d, J=9 Hz, H-3, H-5 van p-coumarinezuur), 7,57 (2H, d, J=9 Hz, H -2, H-6 van p-coumarinezuur), 7,72 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-).

Methanolyse van II, VI, VII en VIII

Verbinding II, VI, VII of VIII (ca. 1 mg) werd 30 min onder terugvloeikoeling gekookt met methanolische 5% CH3COCl (2 ml) en daarna werden de reagentia afgedampt. De aanwezigheid van methylcaffeaat en 3,4- dihydroxyfenethylalcohol in het residu van II, VI en VII, en methyl-p-coumaraat en 3,4-dihydroxyfenethylalcohol in dat van VIII, werd aangetoond met TLC. [CHC13—MeOH (20: 1)] en HPLC [kolom, TSK GEL LS-410AK (4 x 300 mm); oplosmiddel, H20-Me0H (4: 6); detector (UV), 250 nm; stroomsnelheid, 1,0 ml/min]. Methylcaffeaat [R•¬ 0,20, tR (min) 10,8], methyl-p-coumaraat [R•¬ 0,40, tR (min) 15,6], 3.4-dihydroxyfenethylalcohol [R•¬ 0,06, tR (min ) 2.8].

Zure hydrolyse van II, VI, VII en VIII

Een oplossing van glycoside (ca. 2 mg) in 10 procent H2S04 (1 ml) werd gedurende 30 minuten in een kokend waterbad verwarmd. De oplossing werd door een Amberlite IR-45-kolom geleid en het eluaat werd geconcentreerd om een ​​residu op te leveren, dat gedurende 1 uur werd gereduceerd met natriumboorhydride (ongeveer 3 mg). Het reactiemengsel werd door een Amberlite IR-120-kolom geleid en tot droog geconcentreerd. Boorzuur werd verwijderd door destillatie met MeOH en het residu werd gedurende 1 uur geacetyleerd met Ac20 (1 druppel) en pyridine (1 druppel) bij 100°C. De reagentia werden afgedampt. Glucitolacetaat en rhamnitolacetaat werden gedetecteerd in een verhouding van 2 tot 1 van II, VII en VIII, en 1 tot 1 van VI door GC. tR (min): 2,0 (rhamnitolacetaat), 5,5 (glucitolacetaat). Voorwaarden voor GC: kolom, 1,5 procent OV-17 (3 mm x 1,5 m); kolomtemp., 180•Ž; draaggas, N2 (30 ml/min).

Erkenning

We zijn Prof. Dr. SI Ali, afdeling Plantkunde, Universiteit van Karachi, dankbaar voor zijn identificatie van de plant.

Referenties en opmerkingen

1) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase en S. Fukushima, Chem. apotheek Bull., 32, 3009 (1984).

2) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase en S. Fukushima, Chem. apotheek Bull., 32, 3880 (1984).

3) a) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase en S. Fukushima, Chem. apotheek Bull., 33, 1452 (1985); b) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase en S. Fukushima, Yakugaku Zasshi, 106, 562 (1986); c) Idem, ibid., 106, 721 (1986).

4) a) H. Kobayashi en J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase en S. Fukushima, Chem. apotheek Bull., 32, 1729 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645 (1985).

5) E. Nasir en SI Ali, "Flora van West-Pakistan", Vol. 98, Shamin Printing Press, Karachi, 1976, p. 4.

6) SR Baquar en M. Tasnif, "Medicinal Plants of Southern West Pakistan," Vol. 3, Pakistan Council of Scientific and Industrial Research Bulletin/Monograph, Karachi, 1967, p. 56.

7) T. Miyase, A. Koizumi, A. Ueno, T. Noro, M. Kuroyanagi, S. Fukushima, Y. Akiyama en T. Takemoto, Chem. apotheek Bull., 30, 2732 (1982).

8) K. Yoshimoto, Y. Itatani en Y. Tsuda, Chem. apotheek Bull., 28, 2065 (1980).

9) I. Kitagawa, HK Wang, M. Saito, A. Takagi en M. Yoshikawa, Chem. apotheek Bull., 31, 698 (1983).

10) K. Endo, K. Takahashi, T. Abe en H. Hikino, Heterocycles, 16, 1311 (1981). 11) I. Calis, MF Lahloub, E. Rogenmoser en O. Sticher, Phytochemistry, 23, 2313 (1984).