Deel 1|Genetische variatie impliceert plasma-angiopoëtine-2 bij de ontwikkeling van subfenotypes van acuut nierletsel

Pavan K. Bhatraju1,2*, Max Cohen1, Ryan J. Nagao3,4, Eric D. Morrell1, Susanna Kosamo1, Xin-Ya Chai1, Robin Nance5, Victoria Dmyterko1, Joseph Delaney5, Jason D. Christie6, Kathleen D. Liu7, Carmen Mikacenic1, Sina A. Gharib1, W. Conrad Liles8, Ying Zheng3,4, David C. Christiani9,10, Jonathan Himmelfarb2 en Mark M. Wurfel1,2

Abstract

Achtergrond:We identificeerden eerder tweeacuutnierblessure(AKI) subfenotypes (AKI-SP1 en AKI-SP2) met verschillende risico's van slechte klinische resultaten en reacties op vasopressortherapie. Plasma-biomarkers van endotheeldisfunctie (tumornecrosefactorreceptor-1, angiopoietine-1 en 2) onderscheidden de AKI-subfenotypes.

Het is echter niet bekend of deze biomarkers eenvoudigweg markers of causale mediatoren zijn bij de ontwikkeling van AKI-subfenotypes.

Methoden:We hebben getest op associaties tussen single-nucleotide polymorfismen binnen deAngiopoëtine-1, Angiopoëtine-2,enTumornecrosefactorreceptor 1Agenen en AKI-SP2 bij 421 ernstig zieke proefpersonen van Europese afkomst. Best presterende single-nucleotide polymorfismen (FDR < 0.05)="" werden="" getest="" op="" cis-biomarkerexpressie="" en="" of="" genetisch="" risico="" voor="" aki-sp2="" wordt="" gemedieerd="" door="" circulerende="" biomarkers.="" we="" voltooiden="" ook="" in="" vitro-onderzoeken="" met="" behulp="" van="" microvasculaire="" endotheelcellen="" van="" menselijke="" nieren.="" ten="" slotte="" hebben="" we="" de="" renale="" klaring="" van="" plasma-biomarkers="" berekend="" met="" behulp="" van="" 20="" verschillende="" getimede="">

Resultaten:Een genetische variant, rs2920656C > T, dichtbijANGPT2ging gepaard met een verminderd risico op AKI-SP2 (odds ratio, 0,45; 95 procent BI, 0,31–0,66; aangepaste FDR=00,003 ) en verlaagd plasma-angiopoëtine-2 (p = 0.002). Causale gevolgtrekkingsanalyse toonde aan dat voor elk minder belangrijk allel (T) het risico op het ontwikkelen van AKI-SP2 met 16 procent afneemt. Plasma-angiopoëtine-2 bemiddelde 41,5 procent van het rs2920656-gerelateerde risico voor AKI-SP2. Microvasculaire endotheelcellen van menselijke nieren die het T-allel van rs2920656 dragen, produceerden numeriek lagere niveaus van angiopoëtine-2, hoewel dit niet statistisch significant was (p = 0.07). Ten slotte toonden analyses aan dat angiopoëtine-2 minimaal echt wordt geklaard bij ernstig zieke proefpersonen.

Conclusie:Genetische bemiddelingsanalyse levert ondersteunend bewijs dat angiopoëtine-2 een oorzakelijke rol speelt bij het risico op AKI-SP2.

trefwoorden: Acuut nierletsel, Genetica, Endotheel

Voor meer informatie kunt u contact opnemen met:emily.li@wecistanche.com

Cistanche deserticola voorkomt nierziekte, klik hier voor het monster

Achtergrond

acuutnierblessure(AKI) treft 40-60 procent van de patiënten die zijn opgenomen op de intensive care (ICU) en draagt ​​bij aan slechte resultaten op korte en lange termijn. Genetische studies tot nu toe waren gericht op associaties tussen genetische varianten en het risico op AKI, waarbij gevallen (AKI) werden vergeleken met controles (geen AKI). Dit kader kan echter beperkt zijn omdat gevallen vanacuutnierblessurezijn zeer heterogeen met verschillende neerslagmiddelen en biologische profielen. Het combineren van dergelijke AKI-patiënten om de steekproefomvang te maximaliseren, kan resulteren in verdunning van genetische statistische signalen die mogelijk alleen aanwezig zijn in één pathofysiologisch verschillende subset van de AKI-populatie. Een andere beperking is dat AKI bij ernstig zieke populaties vaak een complicatie is van ernstige beledigingen, zoals sepsis, chirurgie, shock, longontsteking en trauma. Het gebruik van controles zonder de ontwikkeling vanacuutnierblessureproblematisch kan zijn. Controles die een genetische variant met een hoog risico dragen, ontwikkelen mogelijk geen AKI als ze niet ook een vergelijkbare acute belediging ervaren als gevallen, en zouden dus worden geclassificeerd als niet-gevallen, waardoor elk potentieel associatiesignaal wordt verzwakt. Het gebruik van biologisch verschillende AKI-subfenotypen in genetische associatiestudies overwint eerdere beperkingen bij het fenotyperen van AKI door specifiek te focussen op de AKI-populatie en door twee biologisch verschillende subfenotypen te vergelijken.

We hebben onlangs twee AKI-subfenotypen (AKI-SP1 en AKI-SP2) geïdentificeerd door de latente klasse-analysemethodologie toe te passen op een panel van 29 klinische en biomarkervariabelen in twee onafhankelijke ernstig zieke AKI-populaties. Met name was AKI-SP2 geassocieerd met slechtere ziekenhuisuitkomsten (bijv. mortaliteit, nieuwe dialyse en 7-dag nierherstel) in vergelijking met AKI-SP1. Vervolgens identificeerden we deze AKI-subfenotypen in een eerder voltooide multicenter gerandomiseerde controlestudie, Vasopressine versus norepinefrine-infusie bij patiënten met septische shock (VASST). De VASST-studie onderzocht of de keuze voor vasopressortherapie de mortaliteit verbeterde bij personen met septische shock. Terwijl de AKI-populatie in de klinische studie geen verschil in mortaliteit had als gevolg van vasopressortherapie, had AKI-SP1 een mortaliteitsvoordeel met vasopressine in vergelijking met AKI-SP2 die geen verschil in mortaliteit had. Voor zover wij weten, is dit het eerste voorbeeld van het identificeren van behandelingsgevoelige AKI-subgroepen bij ernstig zieken.

Met name was geen enkele variabele statistisch beter dan de andere variabelen om AKI-SP2 te identificeren (tabel 1). Daarentegen is een model met drie variabelen, waarbij gebruik wordt gemaakt van plasma-angiopoëtine-2 (ANG-2), angiopoëtine-1 (ANG-1) en oplosbare tumornecrosefactorreceptor{{8 }} (sTNFR-1), had de optimale voorspellende prestatie om te differentiërenacuutnierblessuresubfenotypes (C-statistiek 0.93). Lagere ANG-2, lagere sTNFR-1 en hogere ANG-1 waren geassocieerd met een lager risico op AKI-SP2. Studies in diermodellen van AKI hebben aangetoond dat deze plasma-biomarkers betrokken zijn bij de

pathofysiologie en ernst van AKI. Het is echter niet bekend of deze plasma-biomarkers een oorzakelijke rol spelen bij de ontwikkeling van klinischeacuutnierblessuresub-fenotypes. De identificatie van oorzakelijke markers kan informatie opleveren voor de ontwikkeling van geneesmiddelen om de ontwikkeling van te voorkomen of te behandelenacuutnierblessurebij ernstig zieken en zou kunnen helpen bij de risicostratificatie van de patiënt.

Genetische bemiddelingsanalyse is een van de vele causale gevolgtrekkingsbenaderingen die het potentiële mechanisme kunnen identificeren waarmee een onafhankelijke variabele (bijv. genetische variant) de uitkomst (bijv. AKI-subfenotypes) beïnvloedt via een verklarende bemiddelaar (bijv. biomarker van endotheeldisfunctie) . Deze benadering is op grote schaal toegepast in klinische gegevens om causale mechanismen van ziekte te begrijpen. We veronderstelden dat cis-kwantitatieve trait loci (QTL's) in deANGPT1, ANGPT2 en TNFRSF1Agenen beïnvloeden de ontwikkeling van AKI-subfenotypen door de circulerende niveaus van hun respectieve biomarkers (ANG-1, ANG-2 of sTNFR-1) te reguleren.

Methoden:

Studiepopulaties

We hebben eerder de identificatie van AKI-subfenotypes gerapporteerd met behulp van een prospectief verzameld ICU-cohort: identificatie van Single Nucleotide Polymorphisms (SNP's) die vatbaar zijn voor Altered Acute Lung Injury Risk (iSPAAR). De iSPAAR-populatie is een genoombrede case-control studie naar het risico op acute respiratory distress syndrome (ARDS) met patiënten met en zonder ARDS. De iSPAAR-populatie omvatte proefpersonen uit eerder voltooide gerandomiseerde controleonderzoeken en uit een prospectief ingeschreven IC-cohort. Details van het onderzoeksontwerp voor elke populatie die is ingeschreven in iSPAAR zijn eerder beschreven; Albuterol voor de behandeling van acuut longletsel (ALTA), vloeistof- en katheterbehandelingsonderzoek (FACTT), enterale omega-3-vetzuur, gamma-linoleenzuur en antioxidantensuppletie bij acuut longletsel (OMEGA)

en moleculaire epidemiologie van acute respiratoire nood (MEA) in het Massachusetts General Hospital. Binnen iSPAAR vond de studie-inschrijving plaats 48 uur na opname op de IC. Bij de inschrijving van het onderzoek werden DNA en plasma verzameld voor genotypering en biomarkeranalyse, gevolgd dooracuutnierblessurevaststelling. AKI werd gedefinieerd als een verhoging van serumcreatinine (SCr) van groter dan of gelijk aan 0,3 mg/dl of 50 procent vanaf "baseline" SCr. De baseline SCr werd gedefinieerd als de laagste waarde voorafgaand aan de studie-inschrijving. AKI werd ook gedefinieerd met behulp van aangepaste urine-outputcriteria (dagelijkse output in plaats van elke 6 uur).

Om de renale klaring van plasma-biomarkers te bepalen, hebben we een prospectief cohort ingeschreven op de medische en chirurgische intensive care-afdelingen van Harborview, de Critical IllnessacuutnierblessureCohort (CIA). Proefpersonen kwamen in aanmerking voor inschrijving als ze voldeden aan 2 van de 4 criteria voor het systemische inflammatoire responssyndroom, een klinisch vermoede infectie hadden en een verblijfskatheter voor urine hadden. Er werd een getimede urineverzameling voltooid die ten minste 2-4 uur duurde en EDTA-plasmamonsters werden verzameld aan het begin en het einde van de getimede urineverzameling. Opruiming werd berekend met behulp van de formule Opruiming(X) = U(X) * V/ P(X), waarU(X) vertegenwoordigt de urineconcentratie van opgeloste stofX, V geeft het urinevolume aan gedurende de verzamelperiode van 2–4-u, enP (X) vertegenwoordigt de gemiddelde plasmaconcentraties van opgeloste stofX van de eerste en laatste bloedafnames.

Genotyperingsstrategie

Genotypering werd uitgevoerd bij 421 patiënten van Europese afkomst met behulp van het Illumina 660-platform (Illumina, San Diego, CA). Genotypeerde gegevens werden op kwaliteit gecontroleerd met behulp van een sample call rate filter > 0,97, minor allel frequency (MAF) > 0.01 en SNP call rate > 0,95. Na kwaliteitscontrole, 238 SNP's ±50 kilobasen vanANGPT1, ANGPT2,enTNFRSF1Azijn gevonden. Na koppelingsonevenwicht (LD) snoeien van een r²van {{0}}.8 werden 48 SNP's verwijderd, wat leidde tot een totaal van 190 SNP's die werden gebruikt in associatietests. De imputatie werd uitgevoerd met behulp van het 1000 Genomes Project-referentiepaneel met behulp van IMPUTE2 v2.3.0.

Beoordeling van plasma-eiwitten

Plasma- en urine-biomarkers werden gemeten met behulp van elektrochemiluminescente immunoassays (Meso Scale Discovery (MSD), Rockville, MD), zoals eerder beschreven. Het bloed werd opgevangen in met EDTA behandelde steriele buisjes, urine werd opgevangen in steriele containers en beide werden onmiddellijk gecentrifugeerd. Plasma en urine werden vervolgens in porties verdeeld en bij − 80 graden ingevroren. De monsters werden voor verschillende duur bewaard, maar ze werden ontdooid in een enkele batch en slechts één keer voor het uitvoeren van de biomarkermetingen voor dit onderzoek. Alle biomarkermetingen werden in duplo uitgevoerd bij Harborview Pulmonary Research Laboratories.

In Silico-analyses

Om SNP's te testen op de expressie van QTL-effecten, hebben we de Genotype-Tissue Expression (GTEx) Portal opgevraagd.

Cel cultuur

Microvasculaire endotheelcellen van menselijke nieren (HKME Cs) werden gezuiverd uit foetale nieren na vrijwillige zwangerschapsonderbrekingen tussen 100 en 135 dagen na de conceptie. Geïnformeerde toestemming voor het gebruik van foetale weefsels werd verkregen van patiënten. We kozen vervolgens willekeurig 9 verschillende donoren HKMEC's, ontdooiden en vergulden een half miljoen cellen in T25-kolven bedekt met 0,2 procent gelatine en bewaard in EBM-2 basaal medium met 1 procent antibioticum-antimycoticum (Life Technologies), 10 procent FBS, 100 ug/mL ECGS, 50 ug/mL heparine en 20 ng/mL VEGF (R&D), gedurende 48 uur tot confluentie. Na 48 uur hebben we genomisch DNA van de HKMEC's ​​gezuiverd en werden celsupernatanten verzameld. We hebben met succes cellen van 8 donoren gegenotypeerd.

statistische analyse

Demografische variabelen van patiënten worden gerapporteerd als gemiddelde plus/−standaarddeviatie of als mediaan en kwartielen. Eerst hebben we logistische regressie gebruikt om te testen op een verband tussen de 190 SNP's en de ontwikkeling van AKI-SP2 in vergelijking met AKI-SP1 met behulp van een additief genetisch model (Golden Helix, MT). Ons model werd gebruikt voor de volgende covariabelen: leeftijd, geslacht, sepsis en de eerste vijf hoofdcomponenten. De Eigenstrat-methode v4.2 werd gebruikt om de belangrijkste componenten te berekenen en de top vijf werd als covariabelen opgenomen. Odds ratio's (OR's) worden gerapporteerd met 95 procent betrouwbaarheidsintervallen. Voor de analyse tussen genetische varianten en AKI-subfenotypes hebben we gecorrigeerd voor meerdere vergelijkingen door een Benjamini-Hochberg false discovery rate (FDR) drempel < 0,10="" te="" gebruiken,="" die="" schat="" dat="" minder="" dan="" 10="" procent="" van="" de="" associaties="" met="" een="" fdr-waarde="" op="" of="" lager="" dit="" niveau="" zijn="" valse="" positieven="" [31].="" in="" een="" gevoeligheidsanalyse="" werd="" een="" geïmputeerd="" genotype="" gebruikt="" om="" extra="" snp's="" geassocieerd="" met="" aki-sp2="" te="">

Ten tweede gebruikten we lineaire regressie-aanpassing voor leeftijd, geslacht en sepsis om associaties tussen best presterende SNP's en log₂getransformeerde biomarkerconcentraties. Ten derde hebben we een causale gevolgtrekkingsanalyse voltooid om de associatie tussen genetische varianten en AKI-SP2 en de mogelijke bemiddeling van de associatie door plasma-biomarkerconcentraties te testen. De bemiddelingsanalyse werd uitgevoerd met behulp van de niet-lineaire implementatie van structurele vergelijkingsmodellering geïmplementeerd in het bemiddelingspakket voor STATA [32, 33]. Aanvullende details van de causale gevolgtrekkingsanalyse vindt u in het online supplement. Ten vierde bepaalden we associaties tussen genetische varianten en AKI-ernst, gemeten door maximale serumcreatinine, via logistische regressie. Aanvullende informatie over materialen en methoden vindt u in het online supplement. In de analyse evalueerden we 190 SNP's en gebruikten een conservatievep-waardevan 0,05/190 =2,6 × 10^{− 4}. Aangezien ongeveer 40 procent van de IC-patiënten AKI ontwikkelt, en een verwachte controle (AKI-SP1) tot geval (AKI-SP2) ratio van 1,5, een verwachte steekproefomvang van 421 en een MAF van ten minste { {16}}.30 hebben we 81 procent vermogen om een ​​relatief risico van 1,5 of meer te detecteren [34]. Analyses werden uitgevoerd met STATA (versie 15) en Goldenhelix (versie 4.0). Alle onderzoeken zijn goedgekeurd door de afdeling Humane onderwerpen van de Universiteit van Washington. Schriftelijke geïnformeerde toestemming werd verkregen van alle ingeschreven proefpersonen.

Resultaten

Kenmerken van populaties Van de 425 patiënten uit het validatiecohort in ons vorige werk, hadden 421 genotyperingsgegevens beschikbaar. Demografische gegevens en klinische basiskenmerken worden beschreven in Tabel 1. Alle proefpersonen waren van Europese afkomst. In totaal werden 267 (63 procent) geclassificeerd als AKI-SP1 en 154 (37 procent) als AKI-SP2. Proefpersonen die AKI-SP2 ontwikkelden, hadden een hogere ernst van de ziekte bij presentatie (gemiddelde acute fysiologie en chronische gezondheidsevaluatie (APACHE) III-scores, 111 ± 26 versus 74 ± 24), hadden meer kans op sepsis (84 procent versus 66 procent), en hadden meer kans om te worden behandeld met vasopressoren (79 procent versus 42 procent) in vergelijking met AKI-SP1.

Genetische variatie in de buurt van ANGPT2, rs2920656, is geassocieerd met AKI-SP2

Van de 190 SNP's ±50 kilobasen van de genen waren 72 in de buurt van ANGPT1, 100 waren in de buurt van ANGPT2 en 18 waren in de buurt van het TNFRSF1A-gen. We identificeerden één SNP die voldeed aan een FDR <0, 05="" die="" geassocieerd="" was="" met="" aki-sp2="" in="" vergelijking="" met="" aki-sp1="" (tabel="" 2="" en="" figuur="" 1).="" er="" werden="" geen="" significante="" associaties="" waargenomen="" met="" snp's="" in="" of="" nabij="" angpt1="" of="" tnfrsf1a="" (tabel="" s2="" en="" s3).="" de="" snp="" die="" de="" sterkste="" associatie="" met="" risico="" voor="" aki-sp2="" aantoonde,="" was="" rs2920656="" (or="" 0,45;="" 95="" procent="" bi="" 0,31-0,66;="" p="">< 1,4="" ×="" 10−5;="" fdr="00,003)." deze="" intronische="" snp="" is="" ≈="" 30="" kb="" stroomafwaarts="" van="" de="" 3′-positie="" van="" angp="" t2="" en="" verklaarde="" ongeveer="" 3="" procent="" van="" de="" variantie="">

de ontwikkeling van AKI-SP2 (R2). Omdat slechts een klein aantal proefpersonen homozygoot rs2920656 (n=26) was, testten we ook associaties tussen rs2920656 en AKI-SP2 in een dominant genetisch model, wat consistente resultaten opleverde. resultaten (OR, 0,42; 95 procent BI, 0,28–0,64; p < 1,4="" ×="" 10−="" 6="" ).="" we="" hebben="" ook="" getest="" op="" aanvullende,="" mogelijk="" sterkere="" associaties="" binnen="" de="" angpt2-locus="" met="" behulp="" van="" geïmputeerde="" genotypen,="" maar="" we="" hebben="" geen="" associaties="" gevonden="" die="" sterker="" zijn="" dan="" die="" waargenomen="" met="" rs2920656="" (tabel="" s4).="" in="" een="" gevoeligheidsanalyse="" hebben="" we="" getest="" of="" de="" inclusie="" van="" ernstig="" zieke="" patiënten="">acuutnierblessurezou de genetische associatie beïnvloeden. We groepeerden patiënten zonder AKI en AKI-SP1 samen en bepaalden of rs2920656 nog steeds sterk geassocieerd was met een verlaagd risico op AKI-SP2. In deze analyse hadden 839 patiënten geen AKI of AKI-SP1 en 154 hadden AKI-SP2. Het risico om opnieuw AKI-SP2 te ontwikkelen was significant verminderd met ten minste één T-allel voor rs2920656 (OR 0.31; 95 procent BI, 0.19–0.52; p <0,001) (tabel="" s5).="" in="" een="" andere="" gevoeligheidsanalyse="" hebben="" we="" getest="" of="" rs2920656="" geassocieerd="" was="" met="" een="" verminderd="" risico="" op="" aki-sp2="" in="" elk="" van="" de="" vier="" verschillende="" onderzoeken="" die="" in="" ispaar="" waren="" opgenomen.="" binnen="" elk="" van="" de="" drie="" gerandomiseerde="" controleonderzoeken="" (alta,="" factt="" en="" omega)="" en="" het="" prospectieve="" icu-cohort="" (mea)="" was="" de="" puntschatting="" consistent="" met="" het="" kleine="" allel="" van="" rs2920656,="" wat="" een="" verminderd="" risico="" op="" de="" ontwikkeling="" van="" aki-sp2="" aantoont="" (tabel="" s6="" ).="" zo="" werd="" rs2920656="" verder="" geanalyseerd="" om="" de="" associatie="" met="" plasma-biomarkerconcentraties="" te="">

T-allel van rs2920656 is geassocieerd met verlaagd plasma-ANG-2

Vervolgens analyseerden we de associatie tussen rs2920656 en plasma-ANG-2-concentraties. Aanpassing voor leeftijd, geslacht en sepsis was elk exemplaar van het T-allel van rs2920656 geassocieerd met verlaagde log2-plasmaconcentraties van ANG-2 (= − 0,09; 95 procent BI {{9} }.15, − 0.04; P=0.002). Proefpersonen die homozygoot waren voor het C-allel vertoonden de hoogste plasmaconcentraties ANG-2 (40.683 pg/ml; interkwartielbereik (IQR) 19,374-73,205), terwijl proefpersonen die homozygoot waren voor het T-allel de laagste concentraties vertoonden. plasma-ANG-2-concentraties (28.308 pg/ml (IQR 14,340-42, 944). Bovendien was rs29206565 van de 100 geteste SNP's in de buurt van het ANGP T2-gengebied het sterkst geassocieerd met plasma-ANG -2 concentraties (Fig. 2).

Bemiddelingsanalyse suggereert dat ANG-2 oorzakelijk is in de ontwikkeling van AKI-SP2

We hebben getest op bewijs dat de associatie tussen rs2920656 en het risico op AKI-SP2 wordt gemedieerd door plasma-ANG-2-concentraties (Fig. 3). Het totale effect van rs2920656 op AKI-SP2 was totaal=− 0,16 per allel (95 procent BI -0.24, − 0 .10, p=1.0 × 10− 4 ), wat suggereert dat voor elk klein allel (T-allel) van de genetische variant het risico op het ontwikkelen van AKI-SP2 met 16 procent afneemt. Causale mediatieanalyse detecteerde een significant indirect effect voor rs2920656 op AKI-SP2 dat werd gemedieerd door plasma-ANG-2-concentraties (indirect, − 0,07 per allel; 95 procent BI -0,11, − 0,03; p { {34}}.001), wat betekent dat het aandeel van het effect tussen rs2920656 en AKI-SP2 dat wordt gemedieerd door ANG-2-concentraties 41,5 procent is.

T-allel van rs2920656 is geassocieerd met verminderde AKI-ernst na 7 dagen

Vervolgens testten we de associatie van rs2920656 met traditionele criteria voor de ernst van AKI, zoals maximale serumcreatinine en verhoging van serumcreatinine binnen 7 dagen na inschrijving voor het onderzoek. In een dominant genetisch model was het T-allel van rs2920656 geassocieerd met een afname van serumcreatinine van − 0,44 mg/dL (95 procent BI, − 0,77 , − 0.10), p=0.01) na correctie voor leeftijd, geslacht, body mass index en sepsisstatus. Het minder belangrijke allel van rs2920656 was ook geassocieerd met een afname van de stijging van serumcreatinine tussen baseline en dag 7 (= − 0,25, 95 procent BI, − 0,46, − 0,03; p=0,03)

T-allel van rs2920656 is geassocieerd met lagere ANG-2 in celcultuur

We hebben in vitro-experimenten en in silico-analyses uitgevoerd om de functionele betekenis van rs2920656 te bepalen. Van 8 verschillende menselijke foetussennierzakdoekmonsters, 2 waren CC, 5 waren CT en 1 was TT voor rs2920656. In een dominant genetisch model waren ANG-2-concentraties numeriek het grootst in endotheelcellen van donoren die homozygoot zijn voor het C-allel en lager in dragers van het T-allel, p=0.07 (Fig. 4). In de GTEx-projectdatabase was rs2920656 niet geassocieerd met ANGPT2-genexpressie. Twee andere SNP's (rs41311412 en rs2515591) met matige LD (r2=0.23 en D'=0.86) met rs2920656 waren echter geassocieerd met verminderde ANGPT2-genexpressie (p=4.1 × 10− 5 ) in de tibiale slagader, een weefsel dat sterk verrijkt is voor endotheelcellen (Tabel S7).

Plasma ANG-2 wordt minimaal geklaard door de nieren Om te bepalen of verschillen in:nierfunctieANG{{0}} plasmaconcentraties zou kunnen beïnvloeden, hebben we de nierklaring van ANG-2 gemeten bij ernstig zieke personen met en zonder AKI. In 20 verschillende getimede urinemonsterverzamelingen met geboekte plasmamonsters was de mediane serumcreatinine 0,86 mg/dL met een interkwartielbereik (IQR) van 0,69 tot 1,45 mg/dL. De mediane plasma-ANG-2-concentratie was 10.261 pg/ml (IQR 6210-19.115 pg/ml). Daarentegen waren de ANG-2-concentraties in de urine 50-voudig lager met een mediaan van 206 pg/ml (IQR 11–839 pg/ml). De berekende renale klaring van ANG-2 was < 1="" ml/min="" voor="" alle="" getimede="" urineverzamelingen,="" wat="" suggereert="" dat="" de="" plasmaconcentraties="" van="" ang-2="" niet="" alleen="" worden="" verhoogd="" als="" een="" functie="" van="" verslechterende="" aki="" (tabel="">