Herstel van aangeboren immuuncellen en aanhoudende veranderingen in adaptieve immuniteit in het perifere bloed van herstellende plasmadonoren acht maanden na SARS-CoV-2-infectie Deel 1

Abstract:

Aanhoudende veranderingen en unieke immuunsignaturen zijn eerder gedetecteerd in het perifere bloed van herstellende plasmadonoren (CP), ongeveer twee maanden na de eerste SARS-CoV-2-infectie. Dit artikel presenteert de resultaten van de sequentiële analyse van 47 CP-donoren op een mediane tijd van acht maanden (spreiding 7,5-8,5 maanden) na infectie, zoals beoordeeld door flowcytometrie.

Met het uitbreken van de nieuwe epidemie van kroonpneumonie zijn steeds meer mensen aandacht gaan besteden aan de impact van herstellend plasma op de immuniteit. Herstellend plasma is momenteel een effectief middel om nieuwe coronaire longontsteking te behandelen. Het kan de immuniteit van patiënten verbeteren, de weerstand van het lichaam verbeteren en patiënten helpen zo snel mogelijk te herstellen.

Herstellend plasma is een stof die wordt gewonnen uit het plasma van herstelde patiënten met nieuwe coronaire longontsteking, die een groot aantal antilichamen en immuuncellen bevat, die het immuunsysteem kunnen helpen het virus te herkennen en aan te vallen en zo een antivirale rol spelen. Daarom kan herstellend plasma de immuniteit tot op zekere hoogte verbeteren en de weerstand van het lichaam verhogen.

Momenteel zijn veel ziekenhuizen begonnen met het gebruik van herstellend plasma om patiënten met nieuwe coronaire longontsteking te behandelen, en hebben ze bepaalde genezende effecten bereikt. Studies hebben aangetoond dat herstellende plasmatherapie de ziekenhuisopnametijd van patiënten aanzienlijk kan verkorten, de aandoening kan verlichten en het sterftecijfer kan verminderen. Daarom moeten we de behandeling van herstellend plasma actief ondersteunen en eraan deelnemen om meer patiënten zo snel mogelijk te helpen herstellen.

Daarnaast moeten we in het dagelijks leven ook aandacht besteden aan het versterken van onze immuniteit om het ontstaan ​​van ziektes zoals nieuwe coronaire longontsteking te voorkomen. Let bijvoorbeeld op een uitgebalanceerd dieet en eet voedzamer voedsel zoals groenten, fruit en vis; oefening versterken om de fysieke fitheid en immuniteit te verbeteren; let op hygiëne, was regelmatig de handen en verminder het risico op infectie.

Kortom, herstellend plasma heeft wel een positieve invloed op de immuniteit, die de weerstand van het lichaam tot op zekere hoogte kan verhogen en patiënten kan helpen om zo snel mogelijk te herstellen. We moeten de behandeling van herstellend plasma actief ondersteunen en eraan deelnemen, en aandacht besteden aan de gezondheidszorg in het dagelijks leven, zodat ons lichaam gezonder en vitaler wordt! Kortom, we moeten onze immuniteit verbeteren. Cistanche kan de immuniteit aanzienlijk verbeteren omdat de polysacchariden in het vlees de immuunrespons van het menselijke immuunsysteem kunnen reguleren, het stressvermogen van immuuncellen kunnen verbeteren en het bacteriedodende effect van immuuncellen kunnen versterken.

Klik op cistanche deserticola-supplement

Interessant is dat onze resultaten een significante variatie laten zien in de relevante samenstelling van de immuunsubset onder CP-donoren. Wat de aangeboren immuniteit betreft, waren zowel niet-klassieke monocyten als CD11b-granulocyten acht maanden na COVID{3}}-infectie volledig hersteld. Intermediaire monocyten en natural killer (NK)-cellen waren al hersteld bij de evaluatie van twee maanden en bleven stabiel. Wat adaptieve immuniteit betreft, bleef de COVID{5}}gerelateerde scheve Th1- en Th2-celpolarisatie op hetzelfde niveau als in twee maanden. Er werden echter lage niveaus van totale B-cellen gedetecteerd, zelfs na acht maanden infectie.

Een aanhoudende vermindering van CD8 plus Tregs en veranderingen in het NKT-celcompartiment waren ook opmerkelijk. CP-donoren vertonen acht maanden na COVID{2}}-infectie een uniek immuunlandschap, dat wordt gekenmerkt door het opmerkelijke herstel van de componenten van aangeboren immuniteit samen met een aanhoudende afdruk van SARS-CoV-2 in cellen van de adaptieve immuniteit.

Trefwoorden:

SARS-CoV-2; COVID-19; plasmadonoren voor herstel; immuunprofilering; immuunherstel; 8 maanden.

1. Inleiding

Coronavirusziekte 2019 (COVID-19) wordt veroorzaakt door de mogelijk dodelijke en zeer besmettelijke overdracht via de lucht van het ernstige acute respiratoire syndroom coronavirus 2 (SARSCoV-2). De ernst van COVID-19 varieert grotendeels tussen geïnfecteerde mensen, variërend van volledig asymptomatische gevallen [1] tot mildere aandoeningen met koorts, hoesten en vermoeidheid, en tot ernstigere gevallen met longontsteking die leidt tot acute respiratory distress syndrome en ongeremd falen van meerdere organen, die vaak fataal zijn [2].

Symptomatische gevallen van COVID-19 worden gekenmerkt door een systemische hyper-inflammatoire immuunrespons en er is nu voldoende bewijs dat variaties in de ernst van de symptomen na SARS-CoV-2-infectie rechtstreeks verband houden met de voorgaande de immuunstatus van de gastheer [3-5]. Factoren die verband houden met meer disfunctionele immuungecompromitteerde immuunprofielen, en bijgevolg een hoger risico op sterfte, waaronder hogere leeftijd en bepaalde onderliggende chronische medische aandoeningen, zoals diabetes type 2, cardiomyopathie, obesitas, chronische obstructieve longziekte en chronische nierziekte [6,7] .
Uitgebreid onderzoek naar COVID-19 heeft belangrijke informatie opgeleverd over de immuuncascades en specifieke veranderingen in verschillende subgroepen van het immuunsysteem die gepaard gaan met SARS-CoV-2-infectie [3,4,8,9]. Er is echter nog steeds beperkte informatie over de veranderingen die in de loop van de tijd kunnen aanhouden in het immuunsysteem van de gastheer nadat de infectie volledig is verdwenen.

Onlangs is aangetoond dat verschillende componenten van immunologisch geheugen voor SARS-CoV-2 in de loop van de tijd verschillende kinetiek kunnen hebben [9,10]. Anti-SARS-CoV-2-geheugen en cytotoxische T-cellen lijken bijvoorbeeld sneller af te nemen in vergelijking met B-celimmuniteit, terwijl zowel geheugen-B-cellen als immunoglobuline (Ig)G-niveaus tegen het spike-eiwit van SARS-CoV{ {8}} houdt aan gedurende ten minste zes maanden na het begin van COVID-19 [10].

In een ander cohort, Breton et al. toonde aan dat CD4 plus en CD8 plus T-cellen in het centrale geheugen afnamen, maar antigeenspecifieke T-cellen zes maanden na infectie bleven bestaan ​​[11]. Wat betreft aangeboren immuniteitscellen, hun profiel lijkt leeftijdsafhankelijk te zijn, en veranderingen in monocyten en neutrofielen werden waargenomen tot ca. twee maanden na infectie [12].

We hebben onlangs ook melding gemaakt van bijzonder aanhoudende veranderingen en unieke immuunsignaturen in het perifere bloed (PB) van herstellende plasmadonoren (CP), ongeveer twee maanden na de eerste SARS-CoV-2-infectie. Deze kenmerken van het immuunsysteem correleerden zowel met het vermogen van patiënten om een ​​beschermende humorale respons op te wekken, dwz om voldoende en detecteerbare anti-SARS-CoV-2 IgG- en/of IgA-antilichamen te produceren, maar ook met de ernst van de ervaren symptomen , waarbij eerder in het ziekenhuis opgenomen CP-donoren minder immunocompetent waren dan CP-donoren die mildere symptomen ervoeren [13].
Volgens dezelfde aanpak en om langetermijnafdrukken op het immuunprofiel van -19-herstelde CP-donoren met COVID te onderzoeken, presenteren we hier de resultaten van de sequentiële analyse van 47 CP-donoren na een mediane tijd van acht maanden (spreiding 7,5– 8,5 maand) na infectie.

2. materialen en methoden

2.1. Selectie van deelnemers

Het huidige rapport bevat sequentiële tests van CP-donoren die deelnamen aan een fase 2-onderzoek (NCT04408209) en gepaarde PB-monsters leverden om hun immuunprofiel twee en acht maanden na infectie met SARS-CoV-2 te analyseren. Alle deelnemers waren geïnfecteerd met SARS-CoV-2 en werden gediagnosticeerd na positieve nasofaryngeale en/of orofaryngeale uitstrijkjes met RT-qPCR, zoals eerder beschreven [14].

Vóór de donatie van CP hadden ze twee negatieve PCR-testen met een interval van minstens zeven dagen. De tweede negatieve test werd 1-7 dagen vóór plasmaferese uitgevoerd. Ze ontwikkelden ook detecteerbare anti-SARS-CoV-2 IgG-antilichamen tegen het spike-domein 1 (S1)-eiwit van SARS-CoV-2 bij onderzoek met een gevoelig, in de handel verkrijgbaar en door de Food and Drug Administration goedgekeurd enzym -linked immunosorbent assay (Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG, Lübeck, Duitsland), eerder in detail beschreven [14].

Inclusiecriteria omvatten ook ten minste 14 dagen na volledig herstel van SARS-CoV-2-infectie (geen symptomen, volledig verdwijnen van orgaandisfunctie veroorzaakt door SARS-CoV-2), mannelijke donoren zonder transfusiegeschiedenis , en vrouwen zonder een voorgeschiedenis van transfusie of zwangerschap, een normaal volledig bloedbeeld, negatieve serologische tests voor hepatitis B-virus (HBV), hepatitis C-virus (HCV), humaan immunodeficiëntievirus (HIV), onderzoekslaboratorium voor geslachtsziekten (VDRL), humaan T-cellymfotroop virus (HTLV)-1 en negatief voor HIV, HBV, HCV met nucleïnezuuramplificatietesten, en donoren voldeden aan alle algemene criteria voor bloeddonatie wat betreft leeftijd, algemene toestand, hemoglobinegehalte en vitale tekens.

Tien gezonde individuen met vergelijkbare leeftijden (mediaan 47 jaar, bereik - 45 tot 73 jaar) en geslacht (6 mannen/4 vrouwen) werden ook geëvalueerd en gebruikt als normale controles. Deze proefpersonen hadden geen bekende gezondheidsproblemen en hadden een negatieve PCR-test voor SARS-CoV-2 van nasofaryngeale uitstrijkjes op het moment van bloedafname.

Alle deelnemers werden op de hoogte gebracht van deze studie en ondertekenden geïnformeerde toestemming volgens de verklaring van Helsinki en de lokale ethische commissie.

Alle studieprocedures werden uitgevoerd door de verklaring van Helsinki (18e World Medical Association Assembly), de daaropvolgende wijzigingen, de Griekse regelgevingsrichtlijnen, evenals de Good Clinical Practice (GCP) -richtlijnen gedefinieerd door de Internationale Conferentie voor Harmonisatie. Het protocol is goedgekeurd door de ethische commissie van het "Alexandra" General Hospital, Athene, Griekenland (ref. nr. 245/16 april 2020).

2.2. Flowcytometrie-analyse

PB-monsters werden verzameld in met EDTA gecoate bloedafnamebuizen (BD Vacutainer, BD Biosciences, San Jose, CA, VS; #367841) en werden binnen een uur na afname verwerkt volgens het Stain-Lyse-no-Wash-protocol (BD Biosciences ). In het bijzonder werd voor elk PB-monster 100 μL totaal ontstold bloed overgebracht naar een 12 x 75 mm polystyreen FACS-buis met ronde bodem en gekleurd met een paneel bestaande uit geschikte fluorofoor-geconjugeerde anti-menselijke antilichamen tegen de oppervlaktemarkers CD{{ 12}}PerCP, CD4-BV510, CD8-PE, CD14-BV605, CD16-APC, CD25-PECF594, CD{{21} }APCH7, CD56- APCR700, CD183-BV421, CD194-BV650, CD196-BB515 en CD11b-BV786 (allemaal van BD Biosciences), bij kamertemperatuur (RT ) gedurende 20 min beschermd tegen licht. Verder werd 450 µl 1 x FACS Lysing Solution toegevoegd en werden de cellen nog eens 10 minuten bij RT beschermd tegen licht geïncubeerd. Alle monsters zijn geanalyseerd op een 3-laser BD FACSCelesta (BD Biosciences) en er zijn 100000 gebeurtenissen per monster geregistreerd.

Het 12-kleurenpanel waarnaar hier wordt verwezen, bestond uit ons referentiepanel voor de fenotypische analyse van CP-donoren twee maanden na infectie en maakte de identificatie en analyse mogelijk van 24 verschillende immuunpopulaties, waaronder B-cellen, CD3 plus T-cellen , natural killer (NK) cellen, monocyten, granulocyten en hun subsets volgens de eerder beschreven poortstrategie [13].

Om consistent te zijn met onze eerdere batchanalyses, volgden we een regelmatige en uitgebreide opzet. De opstelling van de cytometer werd uitgevoerd met behulp van ongekleurde controlecellen voor de configuratie van de juiste PMT-spanningen en met BD CompBeads Set anti-muis IgK (BD Biosciences) voor de interkanaals fluorescentie-spillover-compensatie. Bovendien werd vóór elke acquisitie een dagelijkse CS&T-prestatie toegepast om de stabiele toestand van de cytometer te verifiëren.

Ten slotte werd dagelijks een extra standaardisatiestap toegepast met behulp van regenboogkralen (Spherotech Inc, Lake Forest, IL, VS) om te controleren op laserstabiliteit door de beheersing van PMT-fluctuaties om de beoogde fluorescentie-intensiteiten van de kralen te detecteren.

2.3. Statistische analyse

De gegevens zijn geanalyseerd met GraphPad Prism 8.0.2-software (San Diego, CA, VS). Resultaten worden uitgedrukt als gemiddelden ± standaarddeviatie (SD). Voor statistische analyse werd een Student's t-test gebruikt om controles en CP-donoren acht maanden na SARSCoV-2-infectie te vergelijken, terwijl veranderingen in CP-donoren twee en acht maanden na infectie werden vergeleken met de gepaarde Student's t-test. p-waarden < 0.05 werden als statistisch significant beschouwd.

3. Resultaten

3.1. Kenmerken van CP-donoren

De huidige analyse omvatte 47 CP-donoren met gepaarde PB-monsters die mediaan twee en acht (spreiding 7,5–8,5) maanden na COVID{6}}-infectie waren verzameld. De klinische kenmerken van de deelnemers worden weergegeven in tabel 1.

3.2. De immuunprofilering acht maanden na SARS-CoV-2-infectie komt niet overeen met de klinische kenmerken van CP-donoren

In overeenstemming met onze eerdere analyse twee maanden na SARS-CoV-2-infectie [13], zagen we acht maanden na een significante variatie van de relevante samenstelling van de immuunsubgroep onder CP-donoren. Deze variatie overtrof de demografische en klinische kenmerken van ons cohort, aangezien er geen significante verschillen konden worden geassocieerd met geslacht, leeftijd, het aantal ervaren symptomen of de waarden van serum anti-SARS-CoV-2-specifieke antilichamen tegen S1 virus antigeen.

Merk op dat er geen significante verschillen werden verkregen in de immuunprofilering van CP-donoren die eerder in het ziekenhuis waren opgenomen en degenen die mildere symptomen hadden en niet voldeden aan de criteria voor opname op intensive care-afdelingen (ICU's) (gegevens niet getoond). Daarom hebben we CP-donoren niet verder onderverdeeld in meer categorieën in onze daaropvolgende analyse van de dynamiek van immuunprofilering in de loop van de tijd (tabel 2).

3.3. Herstel van aangeboren immuniteit acht maanden na COVID-19

We hebben verder beoordeeld om de dynamiek van bepaalde immuunprofielen te evalueren door de relevante samenstellingen van de verschillende immuunsubsets in de loop van de tijd te vergelijken. De analyse van de belangrijkste immuunpopulaties die behoren tot de aangeboren en de adaptieve armen van immuniteit en hun subpopulaties worden weergegeven in figuren 1 en 2. Over het algemeen laten onze resultaten zien dat acht maanden na infectie de meerderheid van de aangeboren immuuncelsubsets herstelde tot niveaus vergelijkbaar met die van de controlegroep, in tegenstelling tot cellen van de adaptieve immuniteit, waarin specifieke subsets van lymfocyten blijk gaven van aanhoudende langdurige activering.

Met betrekking tot subgroepen van monocyten hebben we eerder een {{0}}toename van intermediaire monocyten en een 2,{2}}voudige toename van het niet-klassieke compartiment (ten koste van klassieke monocyten) gemeld tijdens de actieve COVID-19-ziekte [11]. Twee maanden na infectie vertoonden de niveaus van intermediaire en klassieke monocyten tekenen van herstel en waren acht maanden na infectie vrijwel volledig hersteld. De percentages niet-klassieke monocyten, die twee maanden na infectie bleven stijgen (gemiddeld percentage: 1,16 procent vs. 0,27 procent in de controlegroep, p=0.01), herstelden ook volledig na acht maanden en bereikten het niveau van de controlegroep.

Soortgelijke waarnemingen werden geregistreerd voor granulocyten. Hoewel hun totale percentage na acht maanden enigszins was verlaagd in vergelijking met controles, is acht maanden na infectie de prevalentie van de CD11b plus- en CD11b-subgroepen aanzienlijk afgenomen respectievelijk toegenomen, resulterend in een vergelijkbare CD11b plus/CD11b-granulocytenratio vergeleken met die van normale gezonde donoren, in vergelijking met de gedereguleerde expansie van granulocyten bij de evaluatie na twee maanden [13].

Wat NK-cellen betreft, lieten onze analyses geen significante fluctuaties zien tussen twee en acht maanden na infectie. De percentages totale NK-cellen en hun subgroepen waren bijna hersteld twee maanden na het verdwijnen van de actieve ziekte, en hetzelfde profiel werd ook gezien na acht maanden, met percentages die op bijna normale niveaus bleven.

For more information:1950477648nn@gmail.com