Onderzoeksvooruitgang over de classificatie van diffuus grootcellig B-cellymfoom

Contact:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Diffuus grootcellig B-cellymfoom (DLBCL) is goed voor 25 tot 35 procent van alle non-Hodgkin-lymfomen en is een heterogene en agressieve groep met verschillende klinische, pathologische en biologische kenmerken. lymfoom. Eerdere klinische onderzoeken hebben rituximab, cyclofosfamide, doxorubicine, vincristine en prednison (R-CHOP) geïdentificeerd als de eerstelijns standaardbehandeling voor DLBCL-patiënten, waarvan 50 tot 70 procent van de patiënten dit kan. refractaire of volledige remissie en dan terugval, terwijl slechts 10 procent van de refractaire en recidiverende patiënten kan worden genezen door traditionele salvage-immunochemotherapie in combinatie met autologe hematopoëtische stamceltransplantatie, en de resterende 90 procent van de patiënten slechte behandelresultaten. Daarom is het een enorme uitdaging geworden om de prognose van deze patiënten te verbeteren. Op dit moment zijn er ook klinische studies waarin de combinatie van andere geneesmiddelen (zoals lenalidomide, ibrutinib, enz.) op basis van R-CHOP wordt besproken om de werkzaamheid verder te verbeteren, maar er is geen significante vooruitgang geboekt. DLBCL heeft een aanzienlijke heterogeniteit, dus het maken van nauwkeurige gestratificeerde diagnoses en het begeleiden van geïndividualiseerde behandeling is ook een van de huidige onderzoekshotspots. Dit artikel vat de voortgang van de DLBCL-classificatie samen.

cistamcheVerhoog de celproliferatie

1. COO-typering van DLBCL met behulp van genexpressieprofileringschip

DLBCL heeft duidelijke heterogeniteit in celmorfologie en prognose. In 2000 pasten ALIZADEH en anderen genchiptechnologie toe om 3 186 genen te screenen en te detecteren die een belangrijke rol spelen in de ontwikkeling, differentiatie en carcinogenese van lymfocyten en brachten ze de genexpressie van DLBCL in kaart. Het genexpressieprofiel (GEP) toonde aan dat DLBCL afkomstig was van B-lymfocyten in verschillende differentiatiestadia. Volgens GEP kan DLBCL worden onderverdeeld in twee subtypen: kiemcentrum B-celachtig (GCB) type en geactiveerd B-celachtig (ABC) type. Daaropvolgende studies door ROSENWALD et al. bevestigde ook dit resultaat. Daaropvolgende onderzoeken omvatten meer gevallen en meer soorten genetische screening en vonden dat sommige patiënten de bron van cellen niet konden bepalen, die werden gekarakteriseerd tussen twee subtypen, type 3 genaamd, ook bekend als niet-geclassificeerd. Voor DLBCL van verschillende oorsprong bleek uit de studie dat het verschillende prognoses liet zien, waaronder DLBCL afgeleid van GCB een langere overlevingstijd kon verkrijgen. Cellular-of-origin (COO) typering onthulde de heterogeniteit van DLBCL, en onder R-CHOP-behandeling waren er significante verschillen in overleving tussen subtypes, wat een theoretische basis verschafte voor het evalueren van prognose en regimeselectie. De GEP-testresultaten op basis van genchiptechnologie worden momenteel erkend als de gouden standaard voor het beoordelen van de oorsprong van DLBCL-cellen. De testresultaten zijn het meest betrouwbaar, maar ze zijn duur en vereisen hoge monsters, meestal vers ingevroren levende weefselmonsters, dus de operabiliteit is niet sterk. Het wordt niet veel gebruikt in de klinische praktijk.

2. NanoString-technologie gebruiken voor COO-typering van DLBCL

NanoString (Fluorescent Barcode Labeled Single-Molecule Detection) is een nieuwe high-throughput detectie-genexpressieprofileringstechnologie gebaseerd op de directe meting van fluorescerende moleculaire barcodes op sondes nadat nucleïnezuurmoleculen hybridiseren met sondes. Elke barcodetag komt overeen met een specifieke mRNA-sequentie en tot 800 barcodes kunnen in hetzelfde monster worden gemeten, terwijl het vereiste monstervolume zo laag kan zijn als 100 ng RNA. NanoString's digitale kwantificatietechnologie elimineert de noodzaak voor transcriptie, amplificatie of bibliotheekconstructie, elimineert langdurige experimentele procedures en menselijke hulpbronnen, en minimaliseert mogelijke vertekening die wordt veroorzaakt door enzymatische reacties. Voor klinische monsters met schaarse monsters kan de NanoString-technologie direct gebruik maken van in paraffine ingebedde monsters om RNA te kwantificeren zonder RNA-extractie. Dit technische voordeel maakt het praktischer in de klinische praktijk. SCOTT et al. screende 20 genen op basis van de gegevens van GEP-typering en gebruikte NanoString-technologie om COO-typering uit te voeren op 119 DLBCL-monsters. De consistentie tussen de onderzoeksresultaten en de "gouden standaard" bereikte 95 procent, en patiënten kunnen ook worden onderverdeeld in GCB-type, ABC-type en niet-geclassificeerd type, de laatste twee worden gezamenlijk aangeduid als niet-GCB-type, wat ook laat zien dat de De prognose van het GCB-type is beter dan die van het niet-GCB-type. Andere studies op basis van NanoString-technologie hebben de waarde van deze technologie in de COO-typering van DLBCL verder bevestigd.

Traditioneel Chinees medicijnkruidcistamche, staat ook wel bekend als de "woestijn ginseng"

3. COO-typering van DLBCL met behulp van kwantitatieve PCR-technologie

Zowel genchiptypering als NanoString-typering vereisen dure speciale apparatuur, die in de klinische praktijk moeilijk op grote schaal kan worden toegepast. Kwantitatieve PCR is een veelgebruikte methode voor het verifiëren van genexpressie. Het heeft de kenmerken van een eenvoudige bediening, hoge gevoeligheid en precisie en kan worden verkregen uit in paraffine ingebedde monsters. Het team van Li Xiaoqiu gebruikte kwantitatieve PCR om voor het eerst grootschalige klinische validatie uit te voeren bij Chinese patiëntenpopulaties en ontwikkelde een product dat geschikt is voor klinisch genetisch testen, namelijk de DLBCL-COO-assay. In deze studie werden 32 genen die significant gerelateerd waren aan DLBCL-COO-typering gescreend in de openbare database, en 160 patiënten werden geïncludeerd, en vervolgens werden de methoden van immunohistochemie, kwantitatieve PCR en genchip gebruikt om hun in paraffine ingebedde monsters en overeenkomstige verse Weefselmonsters, de resultaten toonden aan dat de typeringsresultaten van de DLBCL-COO-assay voor 92 procent consistent waren met de "gouden standaard"; overlevingsanalyse toonde aan dat de typeringsresultaten van de DLBCL-COO-assay significant gecorreleerd waren met de totale overleving, en de prognose van het GCB-type was significant beter dan die van het ABC-type (P =0.023), wat zeer consistent is met binnenlandse en buitenlandse onderzoeksresultaten. Relatief gezien is het methodeplatform voor typen met behulp van kwantitatieve PCR-technologie meer open, de bediening is eenvoudiger en het is geschikt voor routinematige ontwikkeling in de meeste laboratoria voor moleculaire pathologie.

4. COO-typering van DLBCL door immunohistochemie

Voor sommige gebieden waar fondsen en technologieën schaars zijn, is de op GEP gebaseerde typeringstechnologie moeilijk op grote schaal te gebruiken, dus de meest klinisch gebruikte typeringsmethode is nog steeds de typeringsmethode op basis van immunohistochemie (IHC). In 2005 pasten HANS en anderen weefselmicroarraytechnologie toe om te typen en stelden ze een IHC-typeringsmodel op door CD10, BCL6 en MUM te detecteren-1. DLBCL kan worden onderverdeeld in GCB-type en niet-GCB-type. De prognose van de eerste is aanzienlijk beter dan die van de laatste. (P<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

De Choi-typering is gebaseerd op vijf biomarkers, waaronder CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 en GCET1, en twee markers, FOXP1 en GCET1 zijn toegevoegd aan de Hans-typeringsmethode, die voor 93 procent consistent is met de "gouden standaard". Eerdere studies hebben aangetoond dat FOXP1 sterk tot expressie wordt gebracht in het ABC-type en dat hoge expressie geassocieerd is met een slechte prognose. Wanneer de kritische waarde van FOXP1 80 procent is, kan ABC-type DLBCL specifiek worden onderscheiden. GCET1 wordt echter sterk tot expressie gebracht in van het kiemcentrum afgeleide B-cellen, dus het toevoegen van GCET1 aan Hans-typering is nuttig om GCB-type en ABC-type DLBCL te onderscheiden. Wat betreft het voorspellen van de prognose, werd de Choi-classificatie gebruikt om de 3-jaarsoverleving van patiënten te voorspellen, waarvan het GCB-type 88 procent was, het ABC-type 44 procent en de voorspellingsresultaten van de "gouden standaard" GEP-classificatie (GCB-type was 92 procent, ABC-type was 44 procent) 44 procent) komt redelijk in de buurt. Li Min et al. vergeleek het voorspellende vermogen van Choi-classificatie en Hans-classificatie en toonde ook aan dat de eerste nauwkeuriger was. De totale overleving van de GCB-groep en de niet-GCB-groep onder de Hans-classificatie vertoonde geen significant verschil (P=0.102), terwijl de Choi-classificatie geen significant verschil in totale overleving liet zien (P=0 .102). De prognose van de GCB-groep was significant beter dan die van de niet-GCB-groep (3-jaarsoverlevingspercentages waren respectievelijk 61,8 procent en 42,5 procent, P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

Zoals hierboven vermeld, hebben op IHC gebaseerde Hans-typering en Choi-typering vergelijkbare functies, en de resultaten van verschillende antilichamen worden in een bepaalde volgorde beoordeeld, waardoor sommige antilichamen een hogere prioriteit hebben dan andere. Met de typemethode kunnen latere antilichaamresultaten worden uitgesloten als aan de voorgaande voorwaarden is voldaan. GEP-typering volgt echter geen bepaalde volgorde of sluit bepaalde resultaten niet uit. Om dergelijke verschillen te verkleinen, hebben MEYER et al. ontwikkelde een typeringsmethode die antilichaamresultaten niet in een specifieke volgorde beoordeelt, namelijk de Tally-typeringsmethode. De hoogste overeenstemming met de "gouden standaard" was 93 procent, terwijl zowel Hans als Choi typten 87 procent was. De tally-type methode omvat gelijke hoeveelheden GCB (GCET1 en CD10) en ABC (FOXP1 en MUM-1) antilichamen, en de classificatie wordt bepaald door het immunofenotypische paar dat meer antigeen-positief is. Voor elk type worden twee antilichamen gebruikt, dus in het geval van hetzelfde positieve resultaat voor elk type, is LMO2 nodig om het immunofenotype te bepalen (LMO2 Groter dan of gelijk aan 30 procent is de grenswaarde). Studies hebben bevestigd dat LMO2 specifiek tot expressie wordt gebracht in GCB-afgeleide B-lymfocyten of lymfomen, en de hoge expressie ervan is significant geassocieerd met een goede prognose bij DLBCL.

Concluderend, hoewel de COO-typeringsmethode van DLBCL op basis van IHC niet zo goed is als NanoString-typering en kwantitatieve PCR-typering, is de consistentie met de "gouden standaard" ook 74 procent -93 procent. Het heeft de voordelen van lage eisen en andere voordelen, die handig zijn voor de routinematige ontwikkeling van verschillende ziekenhuizen. Onder hen zijn de typeringsmethoden van Choi en Tally meer consistent met de "gouden standaard", maar GCET1, FOXP1 en LMO2 zijn geen staande antilichamen, wat hun brede toepassing tot op zekere hoogte beperkt.

cistamche plakjes voor dagelijkse consumptie om celproliferatie te verbeteren en celapoptose te verminderen

5. Verkenning van DLBCL-typering op basis van genmutatie

Bijna alle DLBCL-patiënten hebben genmutaties en patiënten met bepaalde mutaties kunnen de werkzaamheid van specifieke gerichte geneesmiddelen beïnvloeden en dus de prognose beïnvloeden. Daarom heeft DLBCL-subtypering op basis van mutatiesignaturen klinisch nut. SCHMITZ et al. selecteerde vers ingevroren exemplaren van 574 DLBCL-patiënten en gebruikte exome- en transcriptoomsequencing om het DNA-kopienummer van de genchip te analyseren. Onder hen werden 372 genen geselecteerd voor gerichte amplificatie en resequencing om die met reproduceerbare genen te identificeren. Seksueel gemuteerde genen. De onderzoeksresultaten verdeelden DLBCL in 4 genotypen: MCD-type (voornamelijk MYD88L265P en CD79B co-mutatie), BN2-type (voornamelijk BCL6-fusie en NOTCH2-mutatie), N1-type (voornamelijk NOTCH1-mutatie) en EZB-type (voornamelijk EZH2-mutatie) Mutatie en BCL2 translocatie), waaronder MCD- en N1-types voornamelijk zijn afgeleid van ABC, EZB-type is voornamelijk afgeleid van GCB, en BN2-type is verantwoordelijk voor een bepaald deel van respectievelijk ABC, GCB en niet-geclassificeerde patiënten (het GCB-type was goed voor 19 procent, het ABC type goed voor 41 procent, en het niet-geclassificeerde type goed voor 40 procent). De studie toonde ook aan dat de nieuwe genotypen de prognose beter kunnen bepalen, waaronder BN2- en EZB-types een betere prognose hebben dan MCD- en N1-types. MCD-, N1-, BN2- en EZB-types voorspellen 5-jaarsoverlevingspercentages van 26 procent, 36 procent, 65 procent, 68 procent, multivariate analyse toonde ook aan dat het nieuwe genotype een onafhankelijke factor was die de prognose beïnvloedde en niet werd beïnvloed door de IPI-score. Het onderzoeksteam creëerde het LymphGen-algoritme om DLBCL in 7 genotypen te classificeren op basis van eerder onderzoek, door toevoeging van A53 (met TP53-inactivatie), ST2 (met SGK1- en TET2-mutaties) en andere niet-classificeerbare. Deze genotyperingsmethode kon 63,1 procent van de DLBCL-genotypen identificeren . Onder hen heeft het BN2-subtype de beste prognose in het ABC-type, en het ST2-subtype in het GCB-type heeft een betere prognose dan het EZB-subtype. Daarom wordt aangenomen dat de nieuwe genotypering de pathogenese van DLBCL verder onthult, met verschillende pathogenese tussen subtypen, en dat verschillende genotypen verschillend reageren op immunochemotherapie, wat de keuze van gerichte therapie kan beïnvloeden, maar de grootste beperking van deze classificatiemethode is dat sommige patiënten kunnen niet worden ingedeeld in een subtype, dat nader onderzoek verdient.

Door middel van sequentiëring van het hele exoom van 3{{30}}4 DLBCL-patiënten, CHAPUY et al. verkregen gegevens over laagfrequente mutaties, terugkerende mutaties, somatische kopieaantalveranderingen en structurele varianten, en gedefinieerde patiënten als vijf genotypen: C1-type (voornamelijk BCL10-, TNFAIP3-, UBE2A-, CD70-mutatie en BCL6-translocatie, meestal van ABC-oorsprong), C2-type (er is biallele inactivatie van TP53, wat de chromosomale stabiliteit en celcyclus beïnvloedt, en heeft niets te maken met ABC/GCB-oorsprong), C3-type (voornamelijk BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14-mutaties, voornamelijk GCB-oorsprong), C4-type (voornamelijk SGK1-, HIST1H1E-, NFKBIE-, BRAF- en CD83-mutaties, meestal GCB-oorsprong), C5-type (voornamelijk CD79B, MYD88L265P, ETV6), PIM1- en TBL1XR1-mutaties, meestal van ABC-oorsprong, gebruikelijk in het primaire centrale zenuwstelsel en testiculaire DLBCL) en C0-type (gebrek aan duidelijke genetische drivers). De studie analyseerde ook verder de relatie tussen nieuwe genotypen en prognose. De resultaten toonden aan dat C0, C1 en C4 betere prognoses hadden, terwijl C3 en C5 een slechte prognose hadden. Van de van ABC afgeleide patiënten was de prognose van het C1-type significant beter dan die van het C5-type. , terwijl het C4-type significant beter was dan het C3-type bij de van GCB afgeleide patiënten. De nieuwe genotypering definieert ook laagrisico ABC-type DLBCL (type C1), waarvan de cellen hun oorsprong kunnen vinden in de extrafolliculaire marginale zone; en hoog-risico GCB-type DLBCL met BCL2-structuurvarianten en PETN en epigenetische enzymen. Veranderingen (type C3), terwijl laag-risico GCB-type DLBCL geassocieerd is met veranderingen in kinasen en meerdere recombinante eiwitten van meerdere routes (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) (type C4); typering niet gerelateerd aan ABC/GCB-oorsprong Met biallele inactivatie van TP53, instabiliteit van 9p21.3/CDKN2A en verwante genen (type C2). De belangrijkste genetische kenmerken van deze DLBCL's zijn onder meer mutaties, veranderingen in het somatische aantal kopieën en structurele variaties, en veranderingen in deze drie klassen van genetische informatie die kunnen worden gebruikt om verschillen in ziekte- en behandelingsresultaten te verklaren.

Op basis van de gerichte sequencing van 293 genen, LACY et al. analyseerde de genmutatiekenmerken van 928 DLBCL-patiënten en verdeelde de patiënten in 5 subtypes: MYD88-type (voornamelijk MYD88L265P-, PIM1-, ​​CD79B-mutaties, voornamelijk ABC-oorsprong, de meeste originele DLBCL-patiënten met het centrale zenuwstelsel, testis en borst behoren tot dit subtype ); BCL2-type (met EZH2, BCL2, CREBBP, T

De mutaties van NFRSF14, KMT2D en MEF2B zijn voornamelijk, voornamelijk van GCB, sommige hooggradige lymfoom- en DLBCL-patiënten die zijn getransformeerd van folliculair lymfoom behoren tot dit type); SOCS1/SGK1-type (voornamelijk inclusief SOCS1-, CD83-, SGK1-, NFKBIA-, HIST1H1E- en STAT3-mutaties zijn voornamelijk afgeleid van GCB en de meeste primaire mediastinale DLBCL behoren tot dit type); TET2/SGK1-type (voornamelijk inclusief TET2-, SGK1-, KLHL6-, ZFP36L1-, BRAF-, MAP2K1- en KRAS-mutaties, voornamelijk GCB-oorsprong); NOTCH2-type (voornamelijk inclusief NOTCH2-, BCL10-, TNFAIP3-, CCND3-, SPEN-, TMEM30A FAS- en CD70-mutaties, samengesteld uit ABC, GCB en niet-geclassificeerde oorsprong, met vergelijkbare kenmerken als lymfoom in de marginale zone); niet-geclassificeerd subtype (niet elders geclassificeerd, NEC). De studie analyseerde de relatie tussen verschillende genotypen en prognose, en de resultaten toonden aan dat MYD88 de slechtste prognose had, met een 5-jaarsoverleving van 42 procent; BCL2, SOCS1/SGK1 en TET2/SGK1 hadden een goede prognose, met een 5-jaarsoverleving van respectievelijk 64,9 procent, 62,5 procent en 60,1 procent; terwijl de prognose van NOTCH2- en NEC-types tussen de twee lag, en de 5-jaarsoverlevingspercentages respectievelijk 48,1 procent en 53,6 procent waren.

Samenvattend kan worden gezien dat de drie classificatiesystemen niet alleen verschillend zijn, maar ook enige overlappende inhoud hebben. Onder hen zijn de typen MYD88, C5 en MCD allemaal gerelateerd aan de bron van ABC. Primaire lymfomen van het centrale zenuwstelsel en testiculaire lymfomen komen meestal voor in deze drie typen en de prognose is slecht. Type C2 wordt gekenmerkt door TP53-mutatie/deletie en de meeste hebben een slechte prognose, en A53 komt overeen met C2. BCL2-, C3- en EZB-types zijn geassocieerd met de bron van GCB, hebben dezelfde mutatiesignatuur als folliculair lymfoom, en hoewel double-hit en hoogwaardige lymfomen vaker voorkomen bij dit type, is de algehele prognose goed. De SOCS1/SGK1- en C4-typen zijn voornamelijk van GCB afgeleide DLBCL, die vergelijkbare genetische kenmerken hebben als primair mediastinum grootcellig B-cellymfoom en de beste prognose hebben. De huidige typering van mutaties is echter complex en de methoden en resultaten van verschillende onderzoeken zijn verschillend. Daarom moet het analyseproces in de toekomst nog worden vereenvoudigd om de impact van kernmutatiegenen op prognose en behandeling verder te verduidelijken.

cistamchebevat rijke echinacoside en acteoside die het lichaam kunnen voeden en beschermen tegen virussen en ziekten

Overzicht

COO-typering op basis van GEP is de "gouden standaard", maar het vereist hoge monsters, is duur en niet gemakkelijk om routinematig uit te voeren in de klinische praktijk. Als alternatief zijn COO-typering op basis van NanoString, kwantitatieve PCR en immunohistochemische technieken verder geoptimaliseerd in termen van monstervereisten, technische moeilijkheidsgraad en experimentele kosten, maar de nauwkeurigheid van het prognostische oordeel en de rol van begeleidende behandeling is nog steeds hoger dan de gouden standaard. Er is een bepaalde kloof. Huidige onderzoeken hebben ook aangetoond dat bijna alle DLBCL-patiënten genetische mutaties bevatten en dat ongunstige genetische mutaties de prognose aanzienlijk kunnen beïnvloeden. Gerichte therapie van sommige specifieke mutaties kan ook de prognose verbeteren, dus de nieuwe classificatie op basis van genmutaties heeft een belangrijke klinische betekenis. Genmutatietypering is complementair aan COO-typering, wat verklaart dat er ook significante heterogeniteit is binnen hetzelfde COO-subtype. Het typeren van genmutaties kan echter niet alle patiënten omvatten, en verder onderzoek is nodig om de leidende betekenis van de klinische prognose te bevestigen en of traditionele en nieuwe gerichte geneesmiddelen die momenteel worden gebruikt, de behandeling door deze typering kunnen leiden.