Echinacoside oefent antitumoractiviteit uit bij leverkanker
Mar 31, 2022
Contact:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Wen Li*, Jing Zhou, Yajie Zhang, Jing Zhang, Xue Li, Qiao Yan, Jiabing Han en Fangdi Hu*
Abstract
Achtergrond:Echinacoside (ECH) is het belangrijkste actieve ingrediënt van Cistanches Herba, waarvan bekend is dat het therapeutische effecten heeft op gemetastaseerde tumoren. De effecten van ECH op leverkanker zijn echter nog steeds onduidelijk. Deze studie was bedoeld om onderzoek de effecten van ECH op de agressie van leverkankercellen.
Methoden:Twee soorten leverkankercellen Huh7 en HepG2 werden behandeld met verschillende doses ECH op verschillende tijdstippen en gradiënten. MTT- en kolonievormingstests werden gebruikt om de effecten van ECH op de levensvatbaarheid van Huh7 te bepalen en HepG2-cellen. Transwell-assays en flowcytometrie-assays werden gebruikt om de effecten van ECH-behandeling op de invasie, migratie, apoptose en celcyclus van Huh7- en HepG2-cellen. Western blot-analyse werd gebruikt om de effecten van ECH op de expressieniveaus van TGF-β1, smad3, smad7, apoptose-gerelateerde eiwitten (Caspase-3, Caspase-8), en Cyto C in leverkankercellen. De relatie tussen miR-503-3p en TGF-β1 werd gedetecteerd met behulp van bio-informatica analyse en Luciferase reporter assay.
Resultaten:De resultaten toonden aan dat ECH de proliferatie, invasie en migratie van Huh7- en HepG2-cellen in een dosis- en tijdsafhankelijke manier. Bovendien ontdekten we dat ECH Huh7- en HepG2-celapoptose veroorzaakte door cellen in de S-fase te blokkeren. Bovendien bleek de expressie van miR-503-3p verminderd te zijn in levertumorweefsels, maar ECH-behandeling verhoogde de expressie van miR-503-3p in Huh7- en HepG2-cellen. Bovendien vonden we dat TGF-β1 werd geïdentificeerd als een potentieel doelwit van miR-503-3p. ECH bevorderde de activering van de TGF-β1/Smad-signaalroute en verhoogde de expressieniveaus van Bax/Bcl-2. Bovendien zou ECH de afgifte van mitochondriaal Cyto C kunnen veroorzaken, en veroorzaken de reactie Caspases graad.
Conclusies:Deze studie toont aan dat ECH antitumoractiviteit uitoefent via de miR-503-3p/TGF-β1/Smad-as in leverkanker, en biedt een veilige en effectieve anti-tumor agent voor leverkanker.
Zoekwoorden: Echinacoside, Leverkanker, Apoptose, MiR-503-3p, TGF-β1/smad
Cistanche is een veilig en effectief anti-tumor middel voor leverkanker.
Introductie
Leverkanker is een van de meest voorkomende kwaadaardige tumoren met een hoge incidentie en de incidentie van leverkanker groeit snel [1]. Hepatectomie is de beste manier om leverkanker te behandelen voor patiënten in het begin stadia [2]. De meeste patiënten hebben echter recidief en metastase na de operatie. De 5-jaarsoverleving is slechts ongeveer 3-5% [2]. Daarom zijn nieuwe therapeutische benaderingen en agenten zijn dringend nodig.
In de afgelopen jaren, kankermedicijn ontwikkeling en onderzoek naar fytochemicaliën is begonnen aandacht te besteden naar etnofarmacologie [3, 4]. Een groot aantal klinische en experimentele studies hebben aangetoond dat de geneeskunde monomeren kunnen de proliferatie remmen, metastase van hepatocellulaire carcinoomcellen, induceren apoptose en differentiatie van kankercellen [5]. Cistanches Herba is een plant die behoort tot de familie van planten, die traditioneel is geneeskunde in China en staat bekend als "woestijn ginseng" [6]. Cistanches Herba is rijk aan soorten chemische componenten en onderzoekers in binnen- en buitenland hebben geïsoleerd meer dan honderd verbindingen daaruit, waaronder fenylethanolglycosiden, lignanen, cycloalifatische terpenen, suikers, aminozuren, etc. [7]. Echinacoside (ECH) is de hoofdbestanddeel van Cistanches Herba en wordt over het algemeen ook beschouwd als het belangrijkste werkzame bestanddeel [6]. In recente jaren hebben studies aangetoond dat ECH een nieuwe behandelingsoptie kan zijn voor agressieve of breed gemetastaseerde tumoren [8]. Studies hebben aangetoond dat ECH de pancreas kan remmen kanker, leukemie, maagkanker, endometriumkanker, en vele andere tumoren [9]. Er is echter geen rapport over het effect van ECH op de progressie van leverkanker.
MiRNA's spelen een centrale rol in de posttranstrantionele regulatie van genexpressie (10). Uitgebreide studies hebben aangetoond dat miRNA's nauw verwant zijn aan de lever kanker [11] en Multiple Sclerose. MiR-503-3p is een nieuw ontdekt miRNA dat betrokken is bij de proliferatie, migratie en invasie van tumorcellen [12]. De functie ervan bij leverkanker is echter onduidelijk. Nu het onderzoek van miRNA downstream doelgenen is in een relatief volwassen stadium, maar veel doelgen loci blijven Undiscovered. Te TGF-β1/Smad3 signaaltransductie pathway is bijzonder belangrijk voor tumorigenese en ontwikkeling [13]. Er werd vastgesteld dat de TGF-β1/Smad3 pathway werd geactiveerd in het hepatoommodel, wat suggereert dat de TGF-β1/Smad3-route een belangrijke rol heeft gespeeld bij de ontwikkeling van leverkanker [14]. De hoge expressie van de TGF-β1/Smad3-route wordt beschouwd als één van de belangrijkste redenen voor het optreden van leverkanker [15]. Om het onderliggende mechanisme dat de effecten van ECH op leverkanker bemiddelde verder te onderzoeken, heeft het miRNA/ De TGF-β1/Smad3-route werd onderzocht.
In deze studie evalueerden we de effecten van ECH op de progressie van leverkankercellen en ontdekten dat ECH een antitumoractiviteit via de miR-503-3p/TGF-β1/Smad as bij leverkanker, en biedt een veilig en effectief anti-tumor middel voor leverkanker.
Cistanche TCMis anti-kanker.
Methoden en materialen
Materiaal
Echinacoside (ECH) (zuiverheid>98%, monohydraat) was verkregen van Hetian Dichen sashing Pharmaceutical Development Co, Ltd (Xinjiang, China). De structurele formule werd getoond in fig. 1.
Celkweek en transfectie
Menselijke leverkanker cellijnen Huh7 en HepG2 waren gekocht van FENGHUISHENGWU (Hunan, China). Cellen werden gekweekt in DMEM medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS, Gibco, USA) bij 37 °C in een 5% CO2-celincubator. MiR-503-3p mimic en miR-NC werden verkregen van Shanghai Gene Pharmaceutical Co., Ltd. (Shanghai, China). Alle transfecties werden uitgevoerd met behulp van Lipofectamine 2000 reagens (Invitrogen) volgens de instructies van de fabrikant. Na nog eens 24-48 uur, de getransfecteerde cellen werden verzameld en verwerkt voor verdere studies.
Luciferase reporter assay
Totale RNA's werden geëxtraheerd uit cellen en TGF-β werd versterkt met behulp van de WT- en MUT-primers. Een fragment van TGF-β1 werd ingebracht in de pGL3-Bashc luciferase reporter vector genaamd TGF-β-WT-Luc. De binding regio van β1 en miR-503-3p werd gemuteerd om te vormen een gemuteerd plasmide aangeduid als TGF-β1-Mut-Luc. TGFβ1-WT-Luc en TGF-β1-Mut-Luc werden co-transfecteerd in cellen met miR-503-3p mimic en pRLTK. Cellen waren verzameld 6 uur na transfectie. Dual-Luciferase Verslaggever Assay Kit (Promega, Madison, WI, USA) werd gebruikt om bepalen luciferase activiteit.
Celgroei assay
Huh7 en HepG2 cellen (2× 105 ) werden in 96-well geplaatst Platen. Cellen werden vervolgens behandeld met ECH voor 24, 36 en 48 u. Daarna werd aan elk 10 ml MTT-oplossing toegevoegd goed en de cellen werden gedurende 4 uur geïncubeerd. Daarna 150 μL DMSO werd toegevoegd aan de putten. En de absorptie bij 570 nm werd gemeten door een ELISA-lezer (Aoweiya, Peking, China).
Kolonievorming
Eencellige suspensie werd bereid uit de getransfecteerde cellen en gekweekt in een incubator gedurende 7 dagen. Na het weggooien van het medium werden cellen gekleurd met Wright's vlekken gedurende 5 minuten en vervolgens gekleurd met Giemsa-kleuroplossing en Sorensen fosfolybdaat buferoplossing (1:9) gedurende 10 min. Na het wassen werden kolonies geteld onder een microscoop.
Transwell-test
Migratie- en invasietests werden uitgevoerd in Transwell-kamers (Costar, Badhoevedorp, Nederland) gecoat met of zonder Maribel (BD Biosciences) op het bovenoppervlak van het membraan van 8-μm (poriegrootte). Voor migratietest, getransfecteerde Huh7- en HepG2-cellen werden opnieuw gesuspendeerd in 200 μL serumvrije DMEM medium en gezaaid in de bovenste kamers. Voor de invasietest werd Matrigel (30 μg/put) voorgecoat op de membranen van de bovenste kamers en andere stappen waren hetzelfde als de migratietest. Na incubatie van 24 uur, cellen die door het membraan waren gemigreerd of binnengedrongen aan het onderste oppervlak werden bevestigd met ethanol en gekleurd met 0,2% kristalviolet. Ten slotte werden cellen waargenomen en geteld in vijf willekeurige velden met behulp van een microscoop.
Celcyclus analyse
Huh7- en HepG2-cellen werden gezaaid in 6-well-platen op een dichtheid van 1× 105 cellen/ml. Cellen werden verzameld na behandeling met ECH gedurende 0, 24, 48 uur. Tese-cellen waren toen toegevoegd met 1 ml ijs voorgekoeld 75% ethanol, gefixeerd op 20 °C gedurende 2 uur. Daarna werden cellen toegevoegd met PI-kleuroplossing en gedurende 15 minuten in het donker geïncubeerd. De celcyclus werd vervolgens geanalyseerd door middel van flowcytometrie.
Apoptotische celanalyse
Cellen werden verguld in 6-putplaten met een dichtheid van 5× 105 cellen/put. Na verzameling werden cellen gecentrifugeerd en 195 μL Annexin V-FITC bindingsoplossing werd toegevoegd om de cellen opnieuw op te suspenderen. Vervolgens 5 μL Annexin V-FITC en 10 μL propidiumjodide kleuringsoplossing werden toegevoegd. Cellen werden in het donker geïncubeerd en vervolgens geplaatst in een ijsbad.
Cistanche beschermt de lever.
Kwantitatieve reverse transcriptie PCR (qRT-PCR)
De totale RNA's werden geëxtraheerd met trizol-reagens (Haigene, Haerbin, China). Te viiA™ 7 real-time PCR-systeem was gebruikt voor qRT-PCR. RNA werd omgekeerd getranscribeerd in cDNA met behulp van de BeyoRT™ First Strand cDNA Synthese Kit (Beyotime Instituut voor Biotechnologie). U6 werd gebruikt als endogene controle [16]. De primersequenties waren als volgt:
miR-503-3p: vooruit: 5′-CTGATGGTTAAGAGA ATGT-3′,
miR-503-3p: achteruit: 5′-GTCCTTGGACATCCG GGCCG-3′,
U6: vooruit: 5′-GACAGATTCGGTCTGTGGCAC-3′,
U6: omgekeerd: 5′-GATTACCCGTCGGCCATCGATC-3′.
Western blot analyse
De getransfecteerde cellen werden verzameld en totale eiwitten werden geëxtraheerd. Eiwitconcentraties waren bepaald met behulp van de BCA Protein Assay Kit. Eiwitmonsters werden gescheiden door 10% SDS-PAGE en overgebracht op een polyvinylideenfluoridemembraan. Het membraan werd vervolgens geïncubeerd met anti-TGF-β1 (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), SMAD3 (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), SMAD 7 (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), Bcl-2 (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), Bax (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), Cyto C (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), caspase-3 (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), caspase-8 (1:1000, Shifeng, Shanghai, China) en anti-β-actine antilichaam (1:1000, Shifeng, Shanghai, China) 's nachts. Tien werd het membraan geïncubeerd met het anti-konijn secundaire antilichaam (1:1000, Shifeng, Shanghai, China) [17].
Statistische methoden
De gegevens werden gepresenteerd als de gemiddelde±standaardafwijking (SD). Alle statistische analyses werden uitgevoerd met SPSS 13.0-software. De t-toets van de student werd gebruikt voor vergelijkingen. p-waarde< 0.05="" was="" considered="">
Resultaten
Effect van ECH op de activiteit van menselijke leverkankercellen en proliferatie
Om het effect van ECH op de menselijke leverkankercelfunctie te onderzoeken, werd MTT-test uitgevoerd en de resultaten toonden aan dat de cel levensvatbaarheid van HepG2 (Fig. 2a) en Huh7 (fig. 2b) werd geleidelijk afgenomen met de verhoging van de dosis en het tijdstip van ECH-behandeling in vergelijking met met de controlegroep (p< 0.01).="" after="" 48="" h="" exposure="" of="" ech,="" the="" cell="" viability="" was="" the="" lowest,="" so="" 48="" h="" exposure="" of="" ech="" was="" selected="" for="" further="" experiment.="" colony="" formation="" assay="" results="" showed="" that="" the="" number="" of="" colonies="" of="" hepg2="" (fig.="" 2c)="" and="" huh7="" (fig.="" 2d)="" cells="" gradually="" decreased="" by="" treatment="" of="" ech="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" compared="" with="" the="" control="" group="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.001).="" these="" results="" indicate="" that="" ech="" plays="" an="" important="" role="" in="" hcc="" cell="" activity="" and="">
Effecten van ECH op de migratie van menselijke leverkankercellen en invasie
Om het effect van ECH op de menselijke lever verder te onderzoeken kankercelfunctie, celmigratie en invasie waren Gedetecteerd. Zoals weergegeven in fig. 3a, b, vergeleken met de groep zonder behandeling van ECH, waren de migratie en invasie van Huh7- en HepG2-cellen aanzienlijk verminderd na behandeling van ECH op een dosisafhankelijke manier (p<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
ECH gereguleerde menselijke leverkankercelverdeling en apoptose
Om het effect van ECH op leverkankercelapoptose te onderzoeken, werd flowcytometrie uitgevoerd. Als weergegeven in fig. 4a, vergeleken met de controlegroep, de percentage Huh7- en HepG2-cellen in de G0/G1-fase was significant verminderd na behandeling met ECH op een dosisafhankelijke manier (p<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05), wat aangeeft dat ECH de S-fase veroorzaakte arrestatie van Huh7 en HepG2 cellen. Daarnaast is met de verhoging van de dosis ECH, de apoptosesnelheid van Huh7 en HepG2-cellen namen geleidelijk toe in vergelijking met de controlegroep (fig. 4b, p<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
De effecten van ECH op de TGF-β1/Smad-route
Het is bekend dat de TGF-β1/Smad-signaleringsroute goed is betrokken bij celapoptose. Om de mechanisme van ECH-geïnduceerde apoptose in HepG2-cellen. De expressie van de TGF-β1/Smad signaleringsroute was Gedetecteerd. Vergeleken met de controlegroep vonden we dat ECH-behandeling de expressie aanzienlijk verminderde niveaus van TGF-β1 en Smad3 bij zowel mRNA (fig. 5a) als eiwit (fig. 5b) niveaus, en aanzienlijk up-gereguleerd de expressie van Smad7 op dosisafhankelijke wijze bij zowel mRNA- als eiwitniveaus (p<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">
TGF-β1 was een direct doelwit van miR-503-3p
Daarnaast de online voorspellingstool Starbase v2. toonde aan dat TGF-β1 een potentieel doelwit van miR-503-3p (fig. 6a). Luciferase reporter gene assay resultaten toonden aan dat de luciferase activiteit van HepG2 cellen en Huh7 cellen co-transfected met miR-503-3p-mimiek en TGF-β1-WT was significant verminderd, maar niet de cellen co-transfect met miR-503-3p mimic en TGF-β1-MUT (Fig. 6b, p<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">
Effect van ECH op cytochroom C- en caspasenactiviteiten
Zoals weergegeven in Fig. 7a, vergeleken met de controlegroep, hebben we vond dat ECH-behandeling een significante afname veroorzaakte in de expressieniveaus van Bcl-2 in een dosisafhankelijke manier (p<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">
Discussie
Chirurgische resectie is de belangrijkste behandelingsmethode voor patiënten met leverkanker en het recidief- en metastasepercentage na leverresectie is hoog [18, 19]. In deze studie, vonden we dat ECH een bepaald remmend effect heeft op levertumoren, en biedt een veilig en effectief anti-tumor middel voor leverkanker. De klinische praktijk heeft aangetoond dat de traditionele Chinese geneeskunde effectief kan de klinische symptomen van leverkankerpatiënten te verlichten [20]. Voor ECH hebben studies aangetoond dat ECH antioxiderende, antidepressieve, ontstekingsremmende, antivirale, antitumorale en antibacteriële effecten heeft [21, 22]. Bij colorectale kanker, ECH kan tumorcelapoptose induceren door upregulatie caspase-3 en splitsing DNA reparatie enzymen te induceren DNA-oxidatie [23]. In deze studie vonden we voor de eerste tijd dat ECH antitumoractiviteit uitoefent via de miR503-3p/TGF-β1/Smad-as bij leverkanker.
De intercellulaire fase van de celcyclus van eukaryote cellen kan worden onderverdeeld in G1, S en G2. De punten van de verordening van de celcyclus in verschillende perioden worden gereguleerd door verschillende regulerende factoren [24]. Uit deze studie bleek dat het percentage Huh7- en HepG2-cellen in de G0/G1- en De G2/M-fase was verminderd en het percentage cellen in de S-fase was verhoogd na ECH, wat aangeeft dat ECH veroorzaakte S-fase arrestatie van Huh7 en HepG2 cellen. Onbalans van apoptose is een van de belangrijkste mechanismen van menselijke tumoren. Er is gemeld dat anti-tumor chemotherapeutische geneesmiddelen induceren over het algemeen apoptose van kankercellen en controle kanker progressie. In onze studie, we vonden ook dat ECH leverkankercel kon induceren apoptose op een dosisafhankelijke manier, wat suggereert dat het induceren van kankercelapoptose kan een van de onderliggende mechanismen van ECH op leverkanker zijn.
MiRNA's spelen een sleutelrol in de regulatie van HCC-cellen proliferatie, cyclus, apoptose, migratie door interacties met verschillende signaalroutes en moleculen [25, 26]. Zo bleek dat miR-26a hoog is uitgedrukt in normale levercellen, maar het is significant gedownreguleerd in leverkankercellen en remt proliferatie [27]. Overexpressie van miR-503-3p induceert apoptose van longkankercellen en remt celinvasie en migratie [28]. Daarnaast heeft een groot aantal studies aangetoond dat de TGF-β1/Smad signaleringsroute speelt een cruciale rol in de ontwikkeling van leverkanker [7]. Bovendien, wanneer leverkanker zich blijft ontwikkelen, de expressie van TGF-β1 is naar verluidt geleidelijk verhoogd [29]. In deze studie vonden we dat ECH down-gereguleerde TGF-β1 en Smad3, en up-gereguleerde Smad7, aantonen dat ECH de activering van de TGF-β1/Smad-signaleringsroute. In dit onderzoek hebben we vond dat de expressie van miR-503-3p bleek te zijn worden verminderd in levertumorweefsels, maar ECH-behandeling verhoogde de expressie van miR-503-3p in Huh7 en HepG2 cellen. Bovendien vonden we dat TGF-β1 geïdentificeerd als een potentieel doelwit van miR-503-3p. ECH bevorderde de activering van de TGF-β1/Smad signalering pathway en verhoogde de expressieniveaus van Bax/Bcl-2. Deze resultaten suggereren dat miR-503-3p/ TGF-β1/Smad signaleringsroute kan de effecten van ECH op leverkanker bemiddelen. Het is bekend dat de verhoogde Bax/ Bcl-2 ratio kan ervoor zorgen dat Cyto C in de mitochondriën vrijgegeven in het cytoplasma. Cyto C interageert met Caspase-8 en vormt een apoptotisch lichaam dat vervolgens rekruteert en activeert Caspase-3, dat de Caspases-cascade veroorzaakt en celdood bevordert [30]. In deze studie vonden we dat ECH de expressie van Bcl-2 verminderde en verhoogde de expressie van Bax, Cyto C, caspase-8 en caspase-3. Deze resultaten suggereren dat ECH mitochondriaal kan repareren letsel tot op zekere hoogte.
Conclusie In deze studie vonden we dat ECH-behandeling de proliferatie, invasie en migratie, en veroorzaakte de apoptose van leverkankercellen. Het onderliggende mechanisme van de ECH-behandeling op leverkankercellen bleek gerelateerd aan de miR-503-3p/TGF-β1/Smad signaleringsroute. Deze studie zal een zekere experimentele basis bieden voor het onderzoek van ECH naar anti-tumor. Het is vermeldenswaard dat de huidige studie wordt beperkt door het gebrek aan dieren Experimenten. Daarom zal onze toekomstige studie worden uitgevoerd dierproeven om onze bevindingen verder te bevestigen.
