Het anti-verouderingspotentieel van neoperperidon en zijn synergetische effecten Deel 1

Neem dan contact op metoscar.xiao@wecistanche.comvoor meer informatie

Abstract:De anti-verouderingsactiviteit van veel plantaardige flavonoïden, evenals hun werkingsmechanismen, zijn onderzocht in de huidige literatuur. De studies naar de synergetische effecten tussen de verschillende flavonoïde verbindingen waren echter vrij beperkt in eerdere rapporten. In deze studie hebben we, met behulp van een high throughput assay, de synergetische effecten getest tussen verschillende citrus flavonoïden gedurende de chronologische levensduur van de gist (CLS). We bestudeerden het effect van vier flavonoïde verbindingen, waaronder naringine, hesperidine, hesperidine, neohesperidine, evenals hun verschillende combinaties op de CLS van de giststam BY4742. Hun ROS-opruimvermogen, in vitro antioxidantactiviteit en invloed op de extracellulaire pH werden ook getest. De resultaten toonden aan dat neohesperidin de CLS van de gist op een concentratieafhankelijke manier verlengde. Vooral vonden we dat neohesperidine een groot potentieel vertoonde in het individueel of synergetisch uitbreiden van CLS van ontluikende gist met hesperetine. Neohesperidine vertoonde de sterkste functie bij het verminderen van de accumulatie van reactieve zuurstofsoorten (ROS) in gist.puriteinen vitamine cDeze bevindingen gaven duidelijk aan dat neohesperidine mogelijk een anti-aging citrus flavonoïde is, en het synergetische effect met andere flavonoïden op de CLS van gist zal een interessant onderwerp zijn voor toekomstig onderzoek naar de anti-verouderingsfunctie van citrusvruchten.

Zoekwoorden:citrus flavonoïden; neohesperidine; anti-aging activiteit; chronologische levensduur; synergetisch effect

1. Inleiding

Veroudering, een complex en multifactorieel biologisch proces, kan worden gedefinieerd als een geleidelijk verlies van fysiologische en psychologische integriteit, wat leidt tot de geleidelijke verslechtering van bijna alle functies en de verhoogde kwetsbaarheid voor de dood [1]. Een behandeling die zich richt op de meerdere factoren en / of paden binnen het verouderingsproces is een goede kandidaat voor studie. Op dit moment neemt de trend van vergrijzing geleidelijk toe. Vanwege deze trend in de bevolking is het van groot praktisch belang om effectieve manieren te vinden om veroudering te vertragen of de gezonde staat van veroudering te verbeteren. De anti-aging activiteit van fytochemicaliën is bestudeerd door onderzoekers uit een breed scala van disciplines. Veel verschillende plantaardige stoffen zijn gesuggereerd om directe / potentiële anti-aging activiteit te hebben in de bestaande literatuur [2-5].

Klik hier voor meer informatie

De ontluikende gist Saccharomyces cerevisiae heeft een leidende rol gespeeld als modelorganisme voor het bestuderen van evolutionair geconserveerde mechanismen, die relevant zijn voor menselijke veroudering en leeftijdsgerelateerde ziekten [6]. Er zijn twee soorten levensduur in gist, namelijk replicatieve levensduur (RLS)[7] en chronologische levensduur (CLS)[8]. RLS wordt gedefinieerd als het aantal dochtercellen dat een moedercel kan produceren voordat het ontluiken van de cel ophoudt [9], terwijl CLS de tijdsduur is dat ontluikende gistcellen overleven na het ondergaan van een door voedingsstofuitputting geïnduceerde arrestatie van de celcyclus in de stationaire fase [10]. RLS en CLS kunnen dienen als modellen voor prolifererende en niet-prolifererende weefsels in respectievelijk hogere eukaryoten [6].

Het langdurige en succesvolle gebruik van kruidengeneesmiddelcombinaties in de traditionele geneeskunde inspireerde ons om het synergetische effect van fytochemicaliën met gezonde functies te bestuderen.SistancheTegenwoordig is synergiebeoordeling een belangrijk gebied geworden in medisch onderzoek om de efficiëntie van behandelingen te verbeteren en niet slechts één enkel doel te beïnvloeden, maar meerdere doelen[11]. Eerdere onderzoeken hebben aangetoond dat naringine, hesperidine, hesperetine en neohesperidine, wijd verspreid in citrusvruchten, meerdere biologische activiteiten bezitten die relevant zijn voor anti-aging, en de gedetailleerde informatie over deze fytochemicaliën wordt gepresenteerd in de literatuur [12-21]. De fytochemicaliën werden echter minder geëvalueerd als combinaties. Althans, de ternaire combinaties ervan werden zelden gemeld. Ondertussen werd het effect van neohesperidine op de CLS van de ontluikende gist BY4742 niet eerder onthuld.

Om de functie van flavonoïde combinaties op het uitbreiden van de CLS van de ontluikende gist BY4742 te onthullen, werden vier flavonoïde verbindingen, hun binaire en ternaire combinaties effect op CLS van gist BY4742, en hun ROS-opruimvermogen en in vitro antioxidantactiviteit ook getest in het huidige werk. Ondertussen werden de extracellulaire pH-waarden van gist behandeld met de vier verbindingen gedetecteerd, omdat extracellulaire verzuring van het kweekmedium intracellulaire schade zou kunnen veroorzaken in de chronologisch vergrijzende bevolking [22].

2. Resultaten

2.1. Neoperperidin verlengde gistlevensduur op een concentratieafhankelijke manier

DMSO werd universeel gebruikt als oplosmiddel voor de in water onoplosbare geneesmiddelen en verschillende concentraties DMSO beïnvloedden variabel de groei van de gist [23]. Daarom hebben we eerst de juiste DMSO-concentratie gescreend. Zoals te zien is in figuur 1(A), was er geen significant verschil in gistlevensduur bij 0,2% en 0,4% DMSO in het kweekmedium in vergelijking met de controle, terwijl de levensduur bij 0,6% en 0,8% DMSO significant was afgenomen. Om de invloed van oplosmiddel in experimenten te elimineren, hebben we de uiteindelijke mediumconcentratie van DMSO ingesteld op 0,2% voor het uitvoeren van de volgende experimenten.

Cistanche kan anti-aging

High-throughput assays werden gebruikt voor snelle kwantificering van de CLS voor de verdienste van het enorme chronologische verouderingsmodel [24,25]. Daarom hebben we deze methode gebruikt om vier citrus flavonoïden (naringine, hesperidine, hesperetine en neohesperidine) te screenen op hun anti-aging activiteit. We bepaalden de levensduur van de vier fytochemicaliën in een reeks doses, van 0 μM tot 100 μM. Uit het resultaat bleek dat neohesperidine een potentieel vertoonde om de CLS van BY4742 uit te breiden met 0,1 μM, terwijl de andere drie verbindingen de celoverleving bij de ingestelde concentraties niet konden verhogen (figuur 1B)Voor het gemak van combinatorische experimenten werden hier respectievelijk de concentraties A, B, C en D als 100, 0,1,0,1 en 0,1 μM gekozen. Voor de volgende combinatietests werden namelijk A(100 μM naringine), B (0,1 uM hesperidine), C(0,1 μM hesperetine) en D (0,1 μM neohesperetine) gebruikt.

De cumulatieve verwerkingstijd wordt beschouwd als een belangrijke factor bij het beïnvloeden van de celgroei. In overeenstemming met deze hypothese impliceerden onze gegevens dat de vier flavonoïde verbindingen de celgroei niet onmiddellijk beïnvloedden na toevoeging van 24 uur op verschillende verwerkingstijden (figuur 2). Omdat de groeicurves van gistbehandeling met A, B, C en D bijna hetzelfde waren als de controlecurves.wat is cistancheDit toonde ook aan dat de vier verbindingen de gistcelgroei niet remden. Wanneer de verwerking echter op dag 2 werd gestart, konden de groeioverlevingssnelheden/CLS gedurende de langdurige periode veranderen (figuur 3).

Figuur 3. A) De overlevingskansen van gist BY4742 onder de behandeling van verschillende verbindingen en hun combinaties van dag 2 tot dag 20, werden om de twee dagen gemeten. De overlevingskans werd als volgt berekend. Waarbij tOD= 0,3,2 dag de tijd is dat de OD-waarde van dag 2 leeftijdspunt 0,3 bereikt in de uitgroeicurves. Het initiële leeftijdspunt (dag 2) wordt gedefinieerd als 100% levensvatbaarheid en het relatieve overlevingspercentage van elk opeenvolgend leeftijdspunt kan als volgt worden berekend: In =,—×100n = dagen, Dt, vertegenwoordigt de gemiddelde verdubbelingstijd. De overlevingsintegraal (S) voor elke put wordt gedefinieerd als het gebied onder de overlevingscurve (AUC) en kan worden geschat met de formule: SI = E (L +) (dag-dag-1), waarbij dagm het leeftijdspunt is, zoals dag 2, 4,6,8,10, 12,14,16,18 en 20. B) Het effect van de vier flavonoïde verbindingen, en hun binaire en ternaire combinaties op de chronologische levensduur in gist BY4742 bij hun gunstige concentraties. AUC betekent het gebied onder de curve. One-way ANOVA meerdere vergelijkingen. De gegevens werden uitgedrukt als de gemiddelde waarden± standaardfout van het gemiddelde (SEM), n=4.*p<><0.0001.a（100um naringin），="" b（0.1="" μm="" hesperidin），="" c（0.1="" μm="" hesperetin），="" d="" （0.1="" μum="">

2.2.Neohesperidine positief interageerd met hesperetine voor het verlengen van de CLS van gist BY4742

Combinatietherapie bleek een nieuwe en zeer effectieve therapeutische strategie te zijn om vele ziekten te beheersen, zoals diabetes [26], kanker [27], cardiovasculaire aandoeningen [28], obesitas en osteoporose [29]. Hier bestudeerden we het effect van binaire en ternaire combinaties van naringine, hesperidine, hesperetine en neohesperidin op de CLS van ontluikende gist BY4742. Figuur 3A toonde de overlevingskansen van gist onder verschillende flavonoïde behandelingen. Voor elke behandeling werden 10 verouderingspunten gedetecteerd. Het toonde aan dat de overlevingskansen van sommige behandelingen hoger waren in vergelijking met de tegenhangers van controle.Anti-aging cistancheUit figuur 3B bleek duidelijk dat de behandeling van D, BD en ABD significante verschillen vertoonde(p<0.05), just="" weaker="" than="" cd="" and="" bcd=""><0.0001). we="" can="" see="" that="" d(neohesperidin)showed="" an="" important="" function="" in="" the="" individual="" or="" synergistically="" treatments.="" therefore,="" we="" could="" conclude="" that="" neohesperidin="" had="" great="" potential="" in="" increasing="" cls="" of="" budding="" yeast="" by4742="" individually="" or="" synergistically="" with="">

2.3. Neoperperidin verlaagde het gehalte aan intracellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) aanzienlijk

Volgens Harman is cellulaire componentschade veroorzaakt door ROS gegenereerd in mitochondriën de belangrijkste kracht die het verouderingsproces van het organisme versnelt[30,31]. Zoals te zien is in figuur 4A, vertoonden de vier flavonoïden allemaal een opmerkelijk ROS-opruimvermogen. Van de vier afzonderlijke behandelingen had neohesperidine het meest prominente effect.cistanche benefíciosAndere behandelingen gecombineerd, alle ternaire combinaties, en BD ook, verlaagden de intracellulaire ROS niet. Wat betreft de binaire combinaties, zoals AB, AC, AD en BC, vertoonden ze hogere ROS-opruimactiviteiten dan hun overeenkomstige afzonderlijke stoffen. De ROS-opruimcapaciteit van de binaire combinatie BD lag tussen B en D, terwijl de functie van CD bijna hetzelfde was als D.

Figuur 4. (A)Effect van A (100 μM naringine), B (0,1 μM hesperidine), C(0,1 μM hesperetine), D(0,1 μM neohesperidin), hun binaire en ternaire combinaties op intracellulaire ROS-gistspiegels (BY4742)gekweekt in standaard SD-medium na behandeling gedurende 2 dagen (n= 12). De ROS-sonde H2DCFDA werd gebruikt. Dichloordihydrofluoresceïne (DCF). One-way ANOVA meerdere vergelijkingen. De gegevens werden uitgedrukt als de gemiddelde waarden ± standaardfout van het gemiddelde (SEM), n = 12. * p<0.0001;(b)the antioxidant="" capacity="" （y="" m="" trolox="" equivalents/μm="" phytochemical）="" of="" a="" （naringin），="" b（hesperidin），="" c="" （hesperetin），="" d="" (neohesperidin)="" and="" their="" binary="" and="" ternary="" combinations="" evaluated="" by="" 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl="" (dpph,="" frap="" and="" abts="" assays.="" apci="" (antioxidant="" potency="" composite="" index)="Z(the" sample="" data="" of="" each="" method/the="" highest="" sample="" data="" of="" every="" method)/the="" number="" of="" methods="" ·100.="" the="" higher="" the="" apci="" is="" the="" lower="" the="" rank="" number="">

Dit artikel is afkomstig uit Molecules 2019, 24, 4093; DOI:10.3390/molecules24224093 www.mdpi.com/journal/molecules