Toxicologische evaluatie en beschermende effecten van ethanolisch bladextract van Cassia Spectabilis DC op de lever- en nierfunctie van met Plasmodium Berghei geïnfecteerde muizen
Oct 30, 2023
1. Inleiding
Tot op de dag van vandaag is het probleem vanPlasmodiumParasitaire resistentie tegen bestaande antimalariamedicijnen is nog steeds een groot probleem voor de uitroeiing van malaria [1–3]. daarom wordt er nog steeds onderzoek gedaan naar de ontdekking van nieuwe bronnen van antimalariamiddelen, waaronder geneeskrachtige planten [4].In vivoEnin vitromodellen worden al lang gebruikt bij het testen op malaria. In de tweede helft van de 20e eeuw,Plasmodium bergheiofPlasmodium yoeliiwerd gebruikt om knaagdieren te infecteren. In de tussentijd,P. bergheiwerd de meest gebruikte soort voor onderzoek in het leverstadium, met name de vorming van hypnozoiet om herhaling van malaria te onderzoeken [5–7].
KLIK HIER VOOR EEN KRUIDENFORMULERING VAN CISTANCHE VOOR DE NIEREN
Een van de traditionele planten in Indonesië, Cassia spectabilis DC van de Caesalpiniaceae-familie, is experimenteel in vitro bewezen tegen P. falciparum en bij de behandeling van malaria in vivo tegen P. berghei [8, 9], wat erop wijst dat de C. spectabilis DC-plant Er is een groot potentieel om verder te worden ontwikkeld als kandidaat voor antimalariamiddelen. Eerder onderzoek meldde dat een in vivo test op 90% ethanolisch extract van C. spectabilis DC-blad tegen P. berghei ANKA bij BALB/c-muizen aantoonde dat een ED50-waarde 131,5 mg/kg lichaamsgewicht was [9], en deze wordt gecategoriseerd als zeer goede antimalaria-activiteit [10].
Bovendien zijn het extract, de fracties, subfracties en geïsoleerde verbindingen van C. spectabilis DC in vitro getest op hun antimalariaactiviteiten. *De actieve verbinding van deze plant is met succes geïdentificeerd als een verbinding die identiek is aan (–){{0}}hydroxycassine, en de in vitro antimalaria-activiteitstest toonde een zeer lage IC50 van 0,016 ug/ml [ 11], dat geclassificeerd is als een zeer sterke antimalariaactiviteit [12].
Het onderzoek naar deze plant over het overwinnen van resistentie tegen malariamedicijnen is voortgezet door onderzoek naar de veiligheid en effecten van het verbeteren van C. spectabilis DC-bladextract op de lever- en nierfuncties bij met P. berghei ANKA geïnfecteerde muizen. Onderzoeksstudies naar het effect van geneeskrachtige planten met een antimalaria-activiteit op de lever- en nierfuncties van muizen die zijn geïnfecteerd met parasieten zijn op grote schaal uitgevoerd [13–16], evenals acute en subacute toxiciteitstests [17–20]. De lever speelt een belangrijke rol bij het reguleren van fysiologische processen. is een orgaan dat betrokken is bij verschillende vitale functies, zoals metabolisme, secretie en opslag. Bovendien speelt de lever een belangrijke rol bij de ontgifting en uitscheiding van endogene en exogene verbindingen [21-24].
Malaria-infectie begint wanneer sporozoïeten worden geïnfecteerd door met malariaparasieten geïnfecteerde vrouwelijke Anopheles-mugbeet. Tijdens bloedtoevoer injecteert geïnfecteerde vrouwelijke Anopheles het sporozoïetstadium van de parasiet [25, 26]. Na ongeveer een uur reizen door het menselijk lichaam komen sporozoieten de lever binnen, vallen hepatocyten aan en starten de aseksuele cyclus van exoerytrocytische schizogonie. In de levercellen vermenigvuldigen de parasieten zich ongeslachtelijk, totdat ze volwassen schizont bereiken, en uiteindelijk produceert een groot aantal merozoïeten en komt deze in de bloedbaan terecht nadat de hepatocyten zijn gebarsten. *e geïnfecteerde hepatocyten die leverschade veroorzaken als gevolg van het scheuren van geïnfecteerde hepatocyten en merozoïeten komen in de bloedbaan terecht en starten de erytrocytencyclus in de rode bloedcellen [27, 28]. Schade die optreedt in de levercellen kan het aantal enzymen verhogen die op de leverfunctie werken, vooral het transaminase-enzym, en morfologische veranderingen in het uiterlijk van de lever [29, 30], zoals hepatomegalie. Hepatosplenomegalie is een veel voorkomend kenmerk van malaria-infectie bij mensen [31] en muizen [32], veroorzaakt door chronische blootstelling aan malariaparasieten. Echter geen vergroting van de nier bij malaria-infectie.
Het disfunctioneren van de lever kan worden gedetecteerd door hepatocellulaire transaminatie van plasma glutaminezuur-oxaalazijntransaminase (SGOT) en plasmaglutaminepyruvaattransaminase (SGPT) dat vrijkomt in plasma, of door histologisch onderzoek van het weefsel [33]. De meest voorkomende schade is de activering van apoptotische celdood of hepatocytnecrose [34-36]. Klinisch significante betrokkenheid van de nieren wordt in verband gebracht met de infectie door P. falciparum en P. malariae. *De infectie van P. falciparum veroorzaakt acute manifestaties, variërend van asymptomatisch tot urinewegaandoeningen, en milde verstoringen van de elektrolytenbalans voor acuut nierfalen (ARF) of acuut nierletsel (AKI) waarvoor ondersteuning door dialyse nodig is [27, 37]. *Het is bekend dat de gevallen van AKI als complicatie van malaria bijdragen aan een hoog sterftecijfer, namelijk ongeveer 75% van de gevallen. * Histologisch onderzoek suggereert de aanwezigheid van glomerulonefritis, acute tubulaire necrose en interstitiële nefritis als de belangrijkste hemodynamische factor bij malaria-geassocieerde AKI [38]. Over het algemeen kan de mate van nierdisfunctie worden vastgesteld door de aanwezigheid van voldoende hoeveelheden eiwit in de urine en een verhoging van de plasma-ureum-, creatinine- en plasma-elektrolytniveaus [39].
*De toxiciteit van 90% ethanolisch extract van C. spectabilis DC (EECS)-bladeren bij BALB/c-muizen, gevolgd door enzymonderzoeken, kan de histopathologie en de lever- en nierfuncties na EECS-toediening beïnvloeden.
2. materialen en methoden
2.1. Plantmateriaal en voorbereiding van EECS. *e C. spectabilis
DC-bladeren werden gekocht en bepaald in LIPI (Indonesia Research Centre), Botanische Tuin, Purwodadi, Oost-Java, Indonesië (B-160/IPH.06/KS.02/III/ 2019). *Het exemplaar werd als herbarium gedeponeerd bij de afdeling Farmacognosie en Fytochemie, Faculteit Farmacie, Universitas Airlangga. * De bladeren werden grondig gespoeld met kraanwater om vreemde verontreinigingen te verwijderen, gedroogd bij 45 graden en met een molen tot poeder vermalen. *e-extractie werd uitgevoerd door het plantaardige poedermateriaal (500 g) gedurende 3 x 24 uur te macereren in een kolf met 2.500 ml 90% ethanol (bij 25-30 graden). Het extractieoplosmiddel werd afgescheiden, door filtreerpapier gefiltreerd en onder verminderde druk door rotatieverdamping verdampt. * De opbrengst aan ethanolextract van 1000 g gedroogd gewicht C. spectabilis DC-bladpoeder was 10,20% (w/w) en werd in dit experiment gebruikt.
2.2. Dieren.
In het onderzoek werden mannelijke BALB/c-muizen van 6-8 weken oud, met een gewicht van 25-30 g, gebruikt. Alle muizen werden verkregen van Farma Veterinary Center, Directoraat-Generaal van het Ministerie van Landbouw voor Veeteelt en Dierengezondheid, Surabaya, Oost-Java, Indonesië. *de dieren werden onder standaardomstandigheden gehuisvest en ad libitum gevoed met een voorraaddieet en water. *de goedkeuring van het onderzoeksprotocol werd verkregen van de Ethische Commissie voor Dieronderzoek, Universitas Air langga, Indonesië, nummer 2.KE.181.10.2018.
2.3. Acute toxiciteitstest.
EECS werd gewogen en opnieuw gesuspendeerd met 0,5% natriumcarboxymethylcellulose (Na CMC) om de gewenste doses te verkrijgen. BALB/c-muizen werden 24 uur gevast voordat ze met het extract werden gevoed. * De dieren werden in drie groepen verdeeld, waarbij elke groep vijf muizen bevatte. *e doses voor elke groep waren 1.250; 2.500; en respectievelijk 5,000 mg/kg lichaamsgewicht. Het algemene gedrag van elke muis werd continu gedurende één uur na elke dosis geobserveerd, met tussenpozen elke vier uur en daarna gedurende een periode van 24 uur [40-42].
2.4. Subacute toxiciteitstest.
In de subacute toxiciteitstest werden muizen gegroepeerd in drie groepen en elke groep werd in één keer, vijf keer en tien keer behandeld met EECS van een dagelijkse orale dosis van 150 mg / kg lichaamsgewicht gedurende 28 dagen; de normale controlegroep kreeg alleen ad libitum eten en drinken [43]. *De dieren werden gedurende 28 dagen geobserveerd op enig teken van toxiciteit. Aan het einde van de observatieperiode werden alle dieren opgeofferd onder etheranesthesie en werden vitale organen zoals levers en nieren van alle dieren verwijderd voor grof en histopathologisch onderzoek.
2.5. De parasiet van knaagdieren.
De gevoeligheid voor chloroquine van Plasmodium berghei ANKA werd verkregen van het Institute of Biomolecular Eijkman, Jakarta, Indonesië, en gehandhaafd door seriële passages die in dit onderzoek werden gebruikt.
2.6. Effect van EECS op het plasmaniveau van SGOT en SGPT.
*Dit experiment was een suppressieve test gebaseerd op Peters [44]. *Deze onderdrukkende test werd uitgevoerd voorafgaand aan de evaluatie van de EECS op de plasmaspiegels van SGOT en SGPT. *e dieren werden besmet met P. berghei ANKA en verdeeld in vijf groepen van A, B, C, D en E. *e dieren werden kort na infectie behandeld op dag 0 (D0) en werd dagelijks gedurende drie dagen voortgezet (D1-D3). Groep A ontving als negatieve controle 0,5% Na CMC oraal. Groepen B en C kregen net als de behandelde groepen EECS in een enkele orale dosis van respectievelijk 150 en 200 mg/kg lichaamsgewicht. Groep D was een positieve controle die chloroquine kreeg in een enkele orale dosis van 100 mg/kg lichaamsgewicht. Bovendien was groep E als gezonde controle niet besmet met parasieten en kreeg zij slechts ad libitum eten en drinken. Op de vierde dag (D4) werden de bloeduitstrijkjes van elke muis gemaakt en microscopisch onderzocht. Verder werd plasma verzameld voorafgaand aan de meting van SGOT- en SGPT-niveaus.
2.7. Effect van EECS op histopathologie van lever en nieren.
Aan het einde van de observatieperiode werden alle dieren gedood onder etheranesthesie voorafgaand aan de lever- en nierverwijdering. Na het wegen van de organen werden de weefsels vervolgens gefixeerd in een 10% formaldehyde-oplossing en verder verwerkt voor kleuring met hematoxyline-eosine (H&E). * Er werd histopathologische observatie uitgevoerd om het toxicologische effect van EECS op de degeneratieve en necrotische cellen van de weefsels te achterhalen. *e schadevergoeding werd beoordeeld op basis van Gibson-Corley et al. [45].
2.8. Statistische analyse.
*e-gegevens werden weergegeven als gemiddelde ± standaardafwijking (SD). Eenwegsvariantieanalyse (ANOVA) werd gebruikt om de normaal verdeelde gegevens over de behandelingen te vergelijken, gevolgd door een post-hoc meervoudige vergelijkingstest wanneer een andere significantie werd verkregen. Wanneer de gegevens niet normaal verdeeld waren, werden de Kruskal-Wallis en de Mann-Whitney U-test gebruikt om de verschillen tussen behandelingen te beoordelen.
Ondersteunende service van Wecistanche, de grootste cistanche-exporteur in China:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel:+86 15292862950
Winkel voor meer specificaties:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
