Wat zijn de voordelen van Cistanche-polysaccharide op de immuunfunctie?
Mar 10, 2022
Contactpersoon: emily.li@wecistanche.com
De immunologische activiteit en het mechanisme van Cistanche Polysaccharide
Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang
[Abstract]Doel: het bestuderen van deimmuunactiviteit vanCistanchePolysacharide(CDPS) en het mechanisme van zijnimmuunregulering in vitro. Methoden: De thiazoolblauwe colorimetrische methode (MTT) werd gebruikt om het regulerende effect van CDPS te observeren (Cistanche Polysacharide) op IQS DEX TNF dat de proliferatie van muizenthymuslymfocyten in vitro remt; CDPS (Cistanche Polysacharide) werd gebruikt om celcyclus- en celcyclusanalyse uit te voeren met behulp van flowcytometrie. Bepaling van intracellulair Ca2. Resultaten: CDPS (Cistanche Polysacharide) kan bij een hogere concentratie weerstand bieden aan het remmende effect van ISQDEX op de proliferatie van lymfocyten en het remmende effect van hoge concentratie TNF op de proliferatie van lymfocyten, en synergiseren van het proliferatiebevorderende effect van lage concentratie TN F op lymfocyten; 100 ug/ml 200 ug/ml CDPS (Cistanche Polysacharide) kan de cellen in de delingsfase aanzienlijk vergroten; hogere concentratie (100ug/ml) CDPS (Cistanche Polysacharide) kan de concentratie van Ca-ionen in thymocyten van muizen aanzienlijk bevorderen. Conclusie: CDPS (Cistanche Polysacharide) kan ervoor zorgen dat cellen de delingsfase binnengaan, en er wordt geconcludeerd dat het bevorderende effect ervan op de proliferatie van thymus-lymfocyten van de muis gerelateerd is aan de bevordering van calciumafgifte in thymus-lymfocyten van de muis.
Cistanche(CistancheDeserticolaYC Ma) is een zeldzaam en kostbaar Chinees medicinaal materiaal in mijn land. Het wordt vermeld als de hoogste kwaliteit in "Shen Nong's Materia Medica".Cistancheheeft de functies van het voeden van bloed, het voeden van de nieren en het helpen van yang, het hydrateren van de darmen en het vertragen van veroudering. Modern farmacologisch onderzoek toont aan dat:CistanchePolysacharidekan het lichaam verbeterenimmuunfunctie, bevordert de DNA-synthese, versterkt de fysieke kracht, verbetert de intelligentie en heeft duidelijke anti-verouderingseffecten [1]. De auteur bestudeerde de regulatie van CDPS(Cistanche Polysacharide)), een polysacharidecomponent vanCistanche, op deimmuunfunctievan muislymfocyten.
Cistanche Polysacharidepromotenverspreiding vanlymfocyten
1 Materiaal en methoden
1.1 Reagentia en medicijnen.
RPM, I 1640 gemiddeld: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamine: Shanghai Dongfeng-reagensfabriek; Penicilline en streptomycine: farmaceutische fabriek in Noord-China; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Company; Fytohemagglutinine (PHA): Shanghai Medisch Laboratorium; Isoproterenol (ISO): Shanghai Tianfeng Farmaceutische Fabriek; Mercapto-ethanol: Fluka Company; Pasgeboren kalfsserum: Sijiqing Bioengineering Company; Dexamethason (DEX) werd gepresenteerd door Dr. Ma Liang, het eerste aangesloten ziekenhuis van de Zhejiang University School of Medicine; Tumor Suppressor Factor (TNF) werd geleverd door Yu Yuehan, Professor, Department of Cells, School of Life Sciences, Zhejiang University; De rest van de reagentia zijn allemaal in eigen land geproduceerde analytische kwaliteiten.
1.2 Proefdieren.
ICR-muizen, mannelijk, 68 weken oud, met een gewicht van 18-20g, 22, werden gekocht bij Zhejiang Experimental Animal Center.
1.3 Extractie van Cistanche Polysaccharide [2]:
CistanchePolysacharidewordt gewonnen door ons laboratorium! Na het verpletteren van de ruwe drugCistanche, het wordt ondergedompeld in hete ethanol, geëxtraheerd in kokend water en neergeslagen in ethanol. Neutraal enzym gecombineerd met Sewag-methode voor deproteïnisatie, anion DEAE-Sephadex A- 50 uitwisselingschromatografie en Sephacry S-200 gelfiltratiechromatografie om een enkele component van CDPS te verkrijgen (Cistanche Polysacharide)). Droog bewaren, onvolledige RPMI1640 gebruiken om voor gebruik een bepaalde concentratie te maken en steriliseren door ultrafiltratie
1.4 Bereiding van milt- en thymuslymfocyten [3]:
The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, stel de concentratie van miltcellen in op X 10 /ml en de concentratie van thymocyten op × 10 graden /ml
1.5 Lymfocytproliferatiereactie:Volgens de Mosmanmn-methode [4] Verbetering: 96-well celcultuurplaat, voeg 10/ml miltcelsuspensie of water 10/ml thymocytensuspensie 100M1 en verschillende concentraties van geneesmiddelen 10041 toe aan elk putje. Kweek 72 uur in een CO2.37C-incubator. Voeg 4 uur voor het einde van de kweek 8μ1 MTT (5 mg/ml) toe aan elk putje. Aan het einde van de kweek, zuig 150 "1 van het supernatant uit elk putje en voeg 0,5 N isopropanolhydrochloride 150M1 toe. Schud voorzichtig op de microschudder om de blauwe kristallen volledig op te lossen. Meet de OD570 op de microplaatlezer. Stel elk experiment in punt als drie replicerende putten.
1.6 Bepaling van de invloed op de celcyclus [5]:
{{0}}well celcultuurplaat, voeg 4 10 graad/ml thymocytensuspensie 1 ml toe aan elk putje, voeg verschillende reagentia en polysaccharideoplossing toe aan 2 ml in sterk CO, 37 incubators Na 72 uur kweken, centrifugeren bij 1500r/min gedurende 15 min, gooi het supernatant weg, voeg 7 ethanol toe om de geprecipiteerde cellen te fixeren, bewaar bij 4C voor stand-by testen, was de cellen tweemaal met PBS, centrifugeer bij 1500r/min gedurende 15 min, gooi de supernatant en voeg toe. Nadat 0,5 ml 0,1 RNaseA gedurende 30 minuten bij 4°C was gedigereerd, werd 50 ug/ml broomacetaat 30 minuten bij 4°C gekleurd en werd de fluorescentie-intensiteit van de celmonsters gemeten op de FACScan-stroomcytometer. Voor elk monster werden 10 000 celtestpunten verzameld en de gegevens gebruikten Mul-driewielersoftware-analyse.
1.7 Bepaling van de intracellulaire calciumionenconcentratie [6]
Neem muisthymocyten op dezelfde manier als hierboven. Suspendeer in onvolledig RPMIl640 kweekmedium en stel de celconcentratie in op x 10'/ml. Voeg 1 ml thymocytensuspensie en 1 μM toe aan elke experimentele buis Fluo-3AM kleuroplossing 5μ1, 2 procent F-275μ1, na incubatie bij 37 gedurende 30 minuten, tweemaal wassen met onvolledige RPM1640, 1500r/ min, centrifugeer gedurende 10 minuten, gooi het supernatant weg en voeg verschillende concentraties polysachariden en polysachariden toe aan de geprecipiteerde cellen. Na ConA werd de fluorescentie-intensiteit gemeten op de FACScan-flowcytometer. De gegevens van 10 000 celtestpunten werden voor elk monster verzameld en geanalyseerd met CELLQUEST-software. 1.8 Statistische methoden werden gebruikt voor variantieanalyse en de celcyclus en calciumionmeting werden geanalyseerd door de software van de flowcytometer.
Cistanche Polysaccharide van cistanche deserticola
2 Resultaten
2.1 Cistanche Polysaccharide in vitro remt de proliferatie van thymuslymfocyten van muizen door ISO DEX TNF
De -adrenerge receptoragonist isoproterenol (ISO) en een klasse van bijnierschorshormoon dexamethason (DEX) remmen de proliferatie van lymfocyten CDPS (Cistanche Polysacharide) bij een hogere concentratie (75 125ug/ml) kan het remmende effect van ISO DEX op de proliferatie van lymfocyten weerstaan (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polysacharide) (125 ug/ml) bij een hogere concentratie kan het remmende effect van TNF weerstaan en synergetisch de proliferatie van lymfocyten bevorderen met een lage TNF-concentratie (Figuur 2)
2.2 Cistanche Polysaccharide-regulatie van de thymus-lymfocytcyclus
CDPS (CistanchePolysacharide) 25 ug/ml 100 ug/ml 200#g/ml drie concentraties werden gedurende 72 uur op muisthymuslymfocyten ingewerkt, het DNA-gehalte in de cellen werd gemeten met FACS en de proliferatie-index (PI) werd berekend volgens de formule. De resultaten laten zien dat zowel 100 ug/ml als 200 ug/ml de cellen in de delingsfase significant kunnen verhogen, en de proliferatie-index (68,0 procent, 56,6) van beide is significant hoger dan de controlegroep (44,6) en de 200 ug/ml groep is iets lager dan 100 ug/ml groep omdat, bij een concentratie van 200 ug/ml, het effect op celproliferatie een neerwaartse trend is geworden [7]. De PI-waarde (47,5 procent) van de 25ug/ml-groep was niet significant hoger dan die van de controlegroep.
2.3 Het effect van Cistanche Polysaccharide op de calciumionenconcentratie in muisthymocyten
De experimentele resultaten laten zien dat een hogere concentratie (100 ug/ml) CDPS (Cistanche Polysacharidee) kan de verhoging van de calciumionenconcentratie in muisthymocyten significant bevorderen Vergeleken met de controlegroep is er een significant verschil (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">
3 Discussie
Cistanche, algemeen bekend als"woestijn ginseng", is een droge, schilferige vlezige stengel vanCistanche.Cistancheheeft de functies van voedende nier yang, voedende essentie, bloed en darmen. Het behoort tot een soort opwinding van de hypofyse-bijnierschors of heeft een hormoonachtig effect vergelijkbaar met de bijnierschors. Een waardevol Chinees medicijn dat deimmuunfunctievan het lichaam. Onze eerdere onderzoeksresultaten laten zien dat CDPS (Cistanche Polysacharide) in vitro de proliferatie van T-lymfocyten in de thymus die niet zijn geactiveerd of geactiveerd door ConA PHA kunnen bevorderen. Gecombineerd met ConA PHA zijn er twee soorten T-celstimulatoren, we geloven dat CDPS (Cistanche Polysacharide) is een Badjuvant voor T-cellen, en we vonden ook dat CDPS (Cistanche Polysacharide) kan de secretie van muismiltlymfocyten bij hogere concentraties aanzienlijk verhogen [8]
Sommige onderzoeken hebben aangetoond dat recombinant TNF de apoptose van normale muis- en humane T-lymfocytclusters in vitro kan veroorzaken, en dit effect kan mogelijk worden geremd door IIL-2 IL-1 IFN en IIL-4 met dexamethason (DEX) Het kan de proliferatie van lymfocyten remmen door de expressie van lymfocyten en de secretie van IL-2 te remmen en de productie van IL-2R met hoge affiniteit neerwaarts te reguleren. Dit experiment vond dat een hogere concentratie CDPS (CistanchePolysacharide) kan de effecten van een hoge concentratie TN F op de proliferatie van lymfocyten tegengaan. Remming, synergetisch met lage TNF-concentratie om de proliferatie van lymfocyten te bevorderen, en kan het remmende effect van ISQ DEX op de proliferatie van lymfocyten tegengaan. Deze effecten zijn precies via CDPS (CistanchePolysacharide) om de proliferatie van T-lymfocyten te bevorderen en zijn autocrien door T-cellen IL-2 en andere cytokinen om te voltooien.
In de afgelopen jaren zijn er veel studies gedaan naar de immunofarmacologische effecten van plantaardige polysachariden, maar weinig studies naar deimmuunregulatiemechanisme van polysachariden, in het bijzonder de signaaltransductieroute van polysachariden die inwerken op lymfocyten met Ca2 als de tweede boodschapper. Er is geen rapport. Met dit experiment is op dit gebied vooronderzoek gedaan. Intracellulaire signaalmoleculen omvatten cAM R Ca", IP3 DG cGMP, enz., waaronder Ca" een uiterst belangrijk fysiologisch effect op cellen heeft. De toename van de intracellulaire Ca²-concentratie is een belangrijk fenomeen in het vroege stadium van activering en proliferatie van lymfocyten. Dit proces vindt voornamelijk plaats in de eerste tientallen seconden tot minuten wanneer cellen worden geactiveerd door stimulatoren. De klassieke manier van T-celactivering is fosfatidylinositol (PIB) om de fosfatidylspier te metaboliseren. De alcoholmetaboliet 1,4.5-inositoltrifosfaat (IP3) kan de afgifte van Ca, opgeslagen in de binnenste mesh, bevorderen door zich te binden aan de binnenste mesh-receptoren, waardoor het niveau van intracellulair Ca2 en de concentratie van intracellulair Ca toenemen. * verhoogt. Hoog kan de productie van NF-AT (nudeic factor of geactiveerde T-cel) bevorderen, de laatste heeft het effect van het bevorderen van de expressie van het IIL-2-gen. Experimentele resultaten tonen aan dat een hogere concentratie (100 ug/ml ) van CDPS (CistanchePolysacharide) is effectief gedurende 5 10 min. Tijd heeft een significant effect op het verhogen van de concentratie van Ca* in muisthymocyten en heeft een synergetisch effect met ConA. Daarom speculeren we dat CDPS (Cistanche Polysacharide) bevordert de afgifte van calcium in thymuslymfocyten van muizen om de intracellulaire calciumionconcentratie te verhogen. De toename bevordert de expressie van het IL-2-gen en leidt tot de proliferatie van T-cellen, wat een van de theoretische grondslagen is vanCistanchePolysacharidenregulerend effect op het lichaam
Cistanche Polysacharide
Referenties
IN XiuHin, SU Yuke (Algemene situatie van farmacologisch onderzoek naar)CistancheSka J】. Chinese traditionele en kruidengeneesmiddelen ((Chinese kruidengeneeskunde). 1993.24 (10. 550-552(in het Chinees))
ZHANG Weijiee (Biochemische techniek van samengestelde polysaccharide [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994. 16-17 (in het Chinees)
MA Bo- (Ma Baoli). Immunologie techniek: M1. Shanghai Medical University Pres (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n Chinezen))
Mosmann T. Rapiloloimeric-assay voor gemakkelijkere groei en overlevingstoepassing om proliferatie en cytotoxiciteit weg te nemen [JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.
WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, enz.), Het effect van zin op de proliferatie van cyclische cellen inimmuunorgaananalyse met behulp van flowcytometrie [J]. Chinese immunologie (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (in het Chinees)
TAO axin. JIYong-yong, GAO Qi-rong, et al (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong, enz.). FACS-analyse van veranderingen in intracellulair C2 tijdens elactivatie [J] Chinees tijdschrift voor immunologie (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (in Chinees)
ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; Zuivering d polysacdaride vanCistancheDeserticolaYC Mfa en zijn immunomodulerende effecten op Tellfunction [J].burnal van Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (in het Chinees)
Sarin A, Michelle CC. Perre AH Cytotoxische Efed van TNF en Lymphotoxin op T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.
