Enzymatische hydrolyse is ontwikkeld voor de respectieve commerciële enzymen van voedingskwaliteit
Oct 19, 2022
Neem contact oposcar.xiao@wecistanche.comvoor meer informatie
2.2. Ultrafiltratie-effect op collageenhydrolysaateigenschappen
Een ultrafiltratieproces kan een nuttige, industrieel voordelige methode zijn voor het produceren van kleine peptidefracties met een gewenste molecuulgrootte en hoge biologische activiteit, afhankelijk van de samenstelling van het uitgangshydrolysaat en de activiteit die wordt onderzocht [19]. Oplosbaarheid, gehalte aan vrije aminogroepen en de opbrengst van CH's na vriesdrogen wordt getoond (tabel 1). De oplosbaarheid en het gehalte aan vrije aminogroepen van de controle waren respectievelijk 11,95 procent en 0,79 procent. Na enzymatische hydrolyse en ultrafiltratie met een molecuulgewicht van 3 kDa werden de hoogste oplosbaarheid (21,17 procent) en het gehalte aan vrije aminogroepen (14,17 procent) waargenomen in CH-Alcalase.<3 kda.="" however,=""><3 kda="" was="" the="" lowest="" yield="" (12.42%)observed.="" therefore,="" although="" ultrafiltration="" is="" useful="" in="" separating="" chs="" with="" a="" low="" molecular="" weight="" it="" may="" cause="" a="" reduction="" in="">
Het gemiddelde molecuulgewicht van eiwithydrolysaten is een belangrijke factor die hun biologische eigenschappen bepaalt [19]. Over het algemeen een gemiddelde fractie met MW<3 kda="" represents="" a="" collagen="" hydrolysate;="" an="" average="" fraction="" with="" mw="">50 kDa represents gelatin, and an average fraction with MW>300 kDa staat voor collageen [20,21]. De relatieve molecuulgewichtsverdeling van de controle (voorbehandelingsmonster), CH-Alcalase en CH-Alcalase<3 kda="" is="" depicted="" in="" figure="" 4.="" the="" molecular="" weight="" distribution="" was="" over="" 20,100="" da="" for="" the="" control,="" which="" did="" not="" include="" the="" collagen="" hydrolysate=""><3 kda).="" this="" could="" not="" be="" numerically="" provided="" in="" this="" study,="" as="" the="" detection="" limit="" of="" the="" index="" detector="" system="" only="" ranged="" from="" 106="" to="" 20,100="" da.="" however,="" ch-alcalase="" showed="" detectable="" values="" in="" a="" higher="" range="" of="" relative="" molecular="" weight="" distribution,="" which="" ranged="" from="" 20,100="" da="" to="" 4270="" da="" (maximum="" peak:12,600="" da).="" in=""><3 kda,="" the="" molecular="" weight="" distribution="" mainly="" showed="" three="" peaks:="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 4270="" da="" (maximum="" peak),="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 424="" da,="" and="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 222="" da="" and="" 102="" da.="" ultrafiltration="" is="" an="" effective="" purification="" method="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight="" peptides="" from="" crude="" hydrolysates.="" results="" indicated="" that="" enzymatic="" hydrolysis="" by="" alcalase="" clearly="" reduced="" the="" high="" mw="" of="" the="" control="" (either="" collagen="" or="" gelatin),="" and="" that="" ultrafiltration="" was="" an="" effective="" purification="" method="" that="" can="" be="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight=""><3 kda)="" from="" crude="" collagen="" hydrolysates.="" reportedly,="" low="" molecular="" weight="" peptides="" (2-20="" amino="" acids)="" are="" more="" biologically="" active="" compared="" to="" their="" parent="" polypeptide/proteins,="" which="" are="" larger="">
Aminozuursamenstelling in de CH's wordt getoond (Tabel 2). De CHS door verschillende proteasen had verschillende aminozuursamenstellingen en antioxiderende eigenschappen [23]. De aminozuursamenstelling van collageen was rijk aan glycine (Gly), proline (Pro) en glutaminezuur (Glu). Het aminozuurgehalte van CHs (CH-Alcalase en de CH-Alcalase<3 kda)="" increased="" more="" than="" that="" of="" the="" control,="" following="" enzymatic="" hydrolysis="" with="" or="" without="" ultrafiltration.="" in="" particular,="" the="" content="" of="" gly,="" pro,="" and="" glu="" was="" much="" higher="" in=""><3 kda(gly="" 218="" mg/g,="" pro="" 152="" mg/g,="" and="" glu="" 120="" mg/g)="" than="" ch-alcalase(gly149="" mg/g,="" pro="" 95="" mg/g,="" and="" glu78="" mg/g).="" an="" increase="" in="" the="" content="" of="" these="" amino="" acids="" is="" strongly="" related="" to="" enhanced="" antioxidant="" capabilities="" [16,20].="" gly="" and="" pro="" contain="" hydrophobic="" amino="" acid="" groups,="" and="" glu="" contains="" negatively="" charged="" amino="" acid="" groups.="">cistanche stengelVan deze aminozuren is gemeld dat ze de antioxidantactiviteit versterken vanwege hun verhoogde oplosbaarheid in lipiden of via reacties met vrije radicalen [1,24].
2.3. Antioxidant- en anti-verouderingsactiviteiten van collageenhydrolysaten
Antioxidant-activiteiten van de CH's werden gemeten met behulp van 2,2'-en-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonzuur) (ABTS) radicaal-wegvangende activiteitstest en reductievermogenstest. De ABTS-radicaalafvangende activiteit van de controle (collageensuspensie), CH-Alcalase en CH-Alcalase<3 kda="" at="" different="" concentrations="" is="" shown="" (figure="" 5a).abts="" radical="" scavenging="" activity="" of="" peptides="" assay="" is="" important="" to="" exclusively="" measure="" the="" ability="" of="" an="" antioxidant="" peptide="" to="" induce="" a="" hydrogen="" atom="" transfer="" [25].="" abts="" radical-scavenging="" effects="" of="" all="" treatments="" increased="" in="" a="" concentration-dependent="" manner=""><0.05). ch-alcalase="" and=""><3 kda="" showed="" much="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" values,="" with="" 41.4%-88.2%="" compared="" to="" the=""><8.5%. both="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" had="" high="" abtsradical-scavenging="" abilities="" of="" ~60%="" when="" concentrations="" were="" greater="" than="" 2.5="" mg/ml.=""><3 kda="" showed="" a="" significantly="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" value="" than="" ch-alcalase.="">cistanche salsa-extractIn het algemeen kan de antioxidantactiviteit van peptiden worden beïnvloed door hun aminozuursequenties, het aantal aanwezige vrije aminozuren, de mate van hydrolyse en het molecuulgewicht van peptiden [26,27]. In het bijzonder hadden hydrolysaten met een laag molecuulgewicht sterkere antioxiderende eigenschappen in vergelijking met hydrolysaten met een hoog molecuulgewicht [2,26].
Figuur 5. Antioxiderende activiteiten van collageenhydrolysaten (CH) in 2,2'-en-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonzuur)(ABTS)radical scavenging (A) en reducerend vermogen (B) testen. Gegevens aangegeven met verschillende letters (ac) tonen statistisch significante verschillen, afhankelijk van verschillende behandelingen (p<0.05).>cistanche tubulosa voordelen en bijwerkingenGegevens aangegeven met verschillende letters (AD) laten statistisch significante verschillen zien, afhankelijk van de concentratie (p < 0.05).
Cistanche kan anti-aging
De reducerende krachten van de controle, CH-Alcalase en CH-Alcalase<3 kda="" are="" shown="" (figure="" 5b).="" the="" reducing="" power="" of="" peptides="" may="" also="" serve="" as="" a="" significant="" indicator="" of="" their="" antioxidant="" potential="" [28,29].="" the="" reducing="" power="" of="" chs="" ranged="" from="" 0.074="" to="" 0.424="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05). the="" control="" group="" had="" the="" lowest="" reducing="" power,="" which="" did="" not="" change="" significantly="" with="" increasing="" concentrations="" of="" the="" control.="" in="" contrast="" to="" abts="" radical-scavenging="" activity,="" the="" reducing="" power="" of="" ch-alcalase="" was="" higher="" than="" that="" of=""><3 kda.="">cistanche tubulosa-extractVergelijkbare waarnemingen suggereerden dat ruw collageenhydrolysaat effectiever kan zijn in het verminderen van het vermogen dan ultragefilterde collageenpeptiden [30].
Remming van tyrosinase-, collagenase- en elastase-activiteit werd gebruikt om hun in vitro anti-verouderingseffecten te verifiëren [20]. De resultaten van de remming van tyrosinase-, collagenase- en elastase-activiteit van de controle, CH-Alcalase en CH-Alcalase<3 kda="" are="" summarized="" (table="" 3).="" tyrosinase,="" collagenase,="" and="" elastase="" inhibitors="" have="" been="" used="" as="" important="" ingredients="" of="" cosmetics="" for="" skin="" whitening,="" anti-aging,="" and="" anti-wrinkling,="" respectively.="" collagenase="" and="" elastase,="" especially,="" are="" known="" to="" be="" major="" enzymes="" responsible="" for="" dehydration="" and="" wrinkle="" formation="" on="" the="" skin="" surface[31].="" the="" results="" indicated="" that="" the="" tyrosinase="" inhibition="" effect="" of="" vitamin="" c(95.50%,1="" mg/ml,="" positive="" control)="" was="" higher="" than="" that="" of="" the="" other="" treatments(table="" 4).="" tyrosinase="" inhibition="" effects="" of="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 28.21%,="" 15.44%,="" and="" 30.20%,="" respectively.="" thus,="" the="" chs="" did="" not="" show="" a="" better="" skin="" whitening="" effect="" compared="" to="" the="" control.="" collagenase="" inhibition="" by="" the="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 6.45%,54.37%,="" and="" 61.90%,="" respectively.="" in="" addition,="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" inhibition="" of="" collagenase="" corresponded="" to="" that="" of="" vitamin="" cat="" 1="" mg/ml.="" thus,="" chs="" obtained="" from="" this="" study="" may="" be="" effective="" collagenase="" inhibitors="" that="" may="" possibly="" play="" an="" important="" role="" in="" anti-aging="" activities.="" however,="" all="" collagen="" samples="" did="" not="" display="" elastase="" inhibition="" effects,="" which="" may="" result="" from="" a="" lack="" of="" skin="" elasticity.="" overall,="" vitamin="" c(1="" mg/ml)="" inhibited="" various="" activities="" of="" the="" enzymes="" in="" the="" following="" order:="" tyrosinase(95.50%)="">collagenase(48.09)> elastase(2/.00%o).CH-Alcalase(5 mg/mL)inhibited various activities of the enzymes in the following order: collagenase (54.37%)> tyrosinase (15.44%)>elastase (geen activiteit). CH-Alcalase<3 kda="" (5="" mg/ml)="" inhibited="" these="" activities="" in="" the="" following="" order:="" collagenase="" (61.90%)="">tyrosinase (30.20%)>elastase (geen activiteit). Vergelijkbare trends die in een ander onderzoek werden gerapporteerd, gaven aan dat collageenhydrolysaten een potentieel vertoonden om te werken als anti-verouderingsmiddelen en collagenaseremmers [20].
3. Materialen en methoden
3.1. Voorbehandeling van de huid van varkens
Varkenshuid werd gekocht bij een lokale leverancier (Seoul, Korea) en alle zichtbare vet- en bindweefsels van de varkenshuid werden verwijderd met een scheermesje. De varkenshuid die in deze studie werd gebruikt, werd verkregen van één varkens om biologische variatie te minimaliseren. De getrimde varkenshuid werd vier keer gewassen in water op 90 graden gedurende 1 minuut om vet en achtergebleven materialen te verwijderen. De huid werd vervolgens in vierkante secties van 1 cm gesneden en gedurende 3 minuten in gedestilleerd water verpulverd met behulp van een blender met vier vleugels (CNHR -26, Bosch, Hong Kong, China). De verpulverde varkenshuid werd gedurende 5 minuten met hoge snelheid (25, 000 tpm) gehomogeniseerd met behulp van een Ultra Turrax (T25, IKA Labotechnik, Staufen, Duitsland). Ongeveer 100 g van het mengsel van varkenshuid (50 procent uiteindelijke vaste stofgehalte) werd vacuüm verpakt en ingevroren bij -20 graden en opgeslagen voor gebruik binnen 1 maand.
3.2. Commerciële proteasen en reagentia
Alcalase, Flavorzyme, Neutrase en Protamex werden gekocht bij Novozymes (Bagsvaerd, Denemarken). Bromelaïne en papaïne werden gekocht bij Daesong Sangsa (Seoul, Korea). Alle chemicaliën voor antioxidant- en anti-verouderingstests werden gekocht bij de Sigma-Aldrich Chemical Company (St.Louis, MS, VS). Alle andere reagentia en oplosmiddelen die in dit onderzoek werden gebruikt, waren van analytische kwaliteit.
3.3. Enzym hydrolyse
Enzymatische hydrolyse werd ontwikkeld voor de respectieve commerciële enzymen van voedingskwaliteit die werden gebruikt (op basis van de aanbevelingen van de fabrikant; tabel 4). Het bereide mengsel van varkenshuid werd verdund met gedestilleerd water tot een uiteindelijk gehalte aan vaste stof van 5 procent. Deze concentratie werd gekozen om vloeigedrag te verzekeren vanwege de lage viscositeit. Het 5 procent varkenshuidmengsel werd de collageensuspensie (of controle) genoemd. De collageensuspensie werd gehydrolyseerd in reactoren met zes commerciële enzymen van voedingskwaliteit in een enzym:substraatverhouding van 1:100. Monsterhoeveelheden (5 ml) werden genomen na 1, 3,6, 12 en 24 uur hydrolyse en onmiddellijk 10 minuten op 100 graden verwarmd om het enzym te inactiveren, gevolgd door afkoeling tot 0 graden met behulp van ijswater. Gedurende de tijd van bemonstering werd de pH geregeld met gebruikmaking van 1 M NaOH, indien van toepassing. Na afkoeling werden de monsters gedurende 15 minuten bij 4000 x g gecentrifugeerd en werd het supernatant (collageenhydrolysaat; CH) verzameld. CH werd verder geconcentreerd door ultrafiltratie, met behulp van een AmiconStirred Cells-systeem (catalogusnummer UFSC 20001, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, VS) met een molecuulgewichtsgrens van 3 kDa (MWCO) (UltracelMembrane, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, VS) bij 60 psi stikstofgas, op 20 graden.cistanche tubulosa beoordelingenHet bereide CH werd gevriesdroogd en bewaard in luchtdichte containers bij 20 graden tot analyse.
3.4. Bepaling van pH, eiwitterugwinning, oplosbaarheidsvrij aminogroepgehalte en productieopbrengst De pH van de monsters (controle en CH's) werd bepaald met behulp van een pH-meter (Model S220, Mettler Toledo GmbH, Columbus, OH, VS). Het eiwitherstel of de oplosbaarheid werd bepaald door het eiwitgehalte te schatten met behulp van een bicinchoninezuur (BCA) -eiwitassay, volgens de instructies van de fabrikant (Sigma-Aldrich, St. Louis, MS, VS) met serumalbumine als standaard. Het gehalte aan vrije aminogroepen werd bepaald via een 2,4,6-trinitrobenzeensulfonzuur (TNBSA) -test volgens de instructies van de fabrikant (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, VS) met L-leucine als standaard. Zowel natte als droge gewichten werden gemeten om het productieveld te berekenen.
3.5. Molecuulgewichtsverdeling
3.5.1.Natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese (SDS-PAGE)
De SDS-PAGE-patronen van monsters (controle en CH's) werden gemeten volgens een eerder gerapporteerde methode [10]. Monsters werden verdund met 8 M ureum (eindconcentratie eiwit, 4 mg/ml). Elk monster werd gemengd met een deel KTG 020-monsterbuffer (10 procent glycerol, 2 procent SDS, 0,003 procent broomfenolblauw, 5 procent -mercapto-ethanol en 63 mM Tris-HCl, pH 6,8) van KOMA Biotech Inc. ., （Seoul, Korea）, en 2 min gekookt. Het monstermengsel 20 L） werd geladen in EzWayTM PAG 6 procent acrylamidegels (KOMA Biotech Inc., Seoul, Korea). Na elektroforese werd de gel gefixeerd, gekleurd en ontkleurd. De molecuulgewichten werden bepaald met behulp van molecuulgewichtstandaarden met een breed bereik tussen 10 en 210 kDa.
3.5.2. Gelpermeatiechromatografie (GPC)
De molecuulgewichtverdeling van monsters werd bepaald volgens een eerder gerapporteerde methode [3]. Gelpermeatiechromatografie (GPC) werd uitgevoerd met behulp van een YL9100 high-performance vloeistofchromatografie (HPLC)-systeem (YL9100, Youngling Instrument Co., Ltd, Gyeonggi-do, Korea) uitgerust met drie Ultrahydrogel TM 120-kolommen ( 7,8 × 3000 mm) van de wateren (Milford, MA, VS). De mobiele fase was gedestilleerd/gedeïoniseerd water met een stroomsnelheid van 1,0 ml/min, en de molecuulgewichtsverdelingen van de collageenpeptiden werden gevolgd met behulp van een YL 9100 brekingsindexdetector bij 40 graden. Een molecuulgewicht Standards -kit (106-67, 500 DA, Polymer Standards Service, Mainz, Duitsland) diende als standaard.
3.6.Amin0 Zuursamenstelling
De aminozuursamenstelling van de monsters werd geanalyseerd door middel van derivatisering met {{0}}fluorenylethoxycarbonyl (FMOC)-chloride en o-ftaaldialdehyde (OPA) op een Ultimate 3000 HPLC-systeem ( Dionex, Idstein, Duitsland) uitgerust met twee detectoren (een fluorescentiedetector en een UV-detector） en een VDSpher 100 C18-E （4,6 mm × 150 mm, 3,5 m deeltjesgrootte, VDS Optilab, Berlijn, Duitsland). Het injectievolume was 1,0 L en de mobiele fase was samengesteld uit twee eluenten: een 40 mM dibasisch natriumfosfaat (pH 7) en een oplossing van 45% (o/v)acetonitril/45% (v/v) methanol. Door een UV-detector en fluorescentiedetector aan te sluiten, werden ultraviolette stralen gedetecteerd bij 338 nm, werd OPA-derivaat gedetecteerd bij 450 nm van een emissiegolflengte en 340 nm van een excitatiegolflengte, werd FMOC-derivaat gedetecteerd bij 305 nm van een emissiegolflengte van en 266 nm van een excitatiegolflengte. Een aminozuurmengsel (1,0 nmol ml-I voor elk aminozuur) werd gebruikt voor kalibratie.
waarbij atotaalaminozuur het gehalte was na hydrolyse met gebruikmaking van 6 M HC1 (bij 130 graden gedurende 24 uur), en vrij aminozuur het gehalte was na oplossen in gedestilleerd water.
3.7. Evaluatie van antioxidantactiviteit
3.7.1.2,2'-Azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonzuur) (ABTS) Radicaal-wegvangende activiteit
De ABTS-radicaalvangende activiteit van CH werd gemeten volgens een eerder gerapporteerde methode [20]. Het ABTSradicale kation werd gegenereerd door ABTS-voorraadoplossing (7,0 mM) te mengen met kaliumpersulfaat (2,45 mM) en het resulterende mengsel een nacht bij kamertemperatuur in het donker te incuberen. De ABTS-radicaaloplossing werd verdund in 0 mM fosfaatgebufferde zoutoplossing (pH 7,4) tot een absorptieniveau van 0,70 ± 0,02 bij 734 nm. Eén ml van de verdunde ABTS-radicaaloplossing werd gemengd met 1 ml van elk monster. Tien minuten later werden de absorptie van monster (A-monster, met monster) en controle (A-controle zonder monster) gemeten bij 734 nm. De ABTS-radicaalafvangende activiteit (percentage) werd berekend als:
3.7.2.Verminderen van vermogen
Het reducerende vermogen van CH werd gemeten volgens een eerder gerapporteerde methode [20]. Eén ml van elk monster werd gemengd met 1 ml 0,2 M fosfaatbuffer (pH 6,6) en 1 ml 1 procent kaliumferricyanide. Het mengsel werd gedurende 20 minuten bij 50 graden geïncubeerd en vervolgens werd 1 ml 10% trichloorazijnzuur toegevoegd. Een hoeveelheid van 2 ml van dit incubatiemengsel werd gemengd met 2 ml gedestilleerd water en 0,4 ml 0,1 procent ferrichloride. Na 10 minuten werd de absorptie van de resulterende oplossing gemeten bij 700 nm op een spectrofotometer (OPTIZEN, Mecasys Co., Daejeon, Korea). Verhoogde absorptie (bij 700 nm) van het reactiemengsel werd beschouwd als een indicatie van een verhoogd reducerend vermogen.
3.8. Evaluatie van het anti-verouderingseffect
3.8.1. Remming van tyrosinase-activiteit
Tyrosinaseremming werd bepaald door een eerder beschreven methode [2 0]. Een uitpretingsoplossing met 70 ul 0,1 M fosfaatbuffer （pH6.8）, 30Ulof paddestoel tyrosinase （167U/ml; Sigma-Aldrich, VS), en 20 L van het monster werden 5 minuten bij 30 graden geïncubeerd. Ongeveer 100μl 3, 4- dihydroxy fenyl-l-alanine （L-dopa） werd vervolgens toegevoegd om de enzymatische reactie te initiëren. Absorptie bij 492 nm werd gedurende 20 minuten gemeten om de vorming van L-DOPA te controleren. Ascorbinezuur (1 mg/ml) diende als een positieve controle, die werd gebruikt voor vergelijking. De remmingsverhouding werd als volgt berekend:
waar A een mengsel was met tyrosinase zonder monster; B was een mengsel zonder monster en tyrosinase; C was een mengsel met monster en tyrosinase, en D was een mengsel met een monster maar zonder tyrosinase.
3.8.2. Remming van collagenase-activiteit
Collagenaseremming werd bepaald met een eerder beschreven methode [20]. In het kort werd 50 mM tricinebuffer (pH 7,5) met 10 mM calciumchloride en 400 mM natriumchloride bereid. Then,50mLof a 1.0mM N-[3-(2-furyl) acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala solution and 0.2 mg/ml collagenase (from Clostridium histolyticum, Type IA, 0.{ {19}} FALGPA U/mg vaste stof; Sigma-Aldrich, VS) werden toegevoegd in aanwezigheid en afwezigheid van monsters. De reactie werd gestopt door citroenzuur (6 procent) toe te voegen. Het reactiemengsel werd gescheiden door toevoeging van ethylacetaat. De absorptie van het supernatant werd gemeten bij 345 nm. Ascorbinezuur (1 mg/ml) diende als de positieve controle en werd ter vergelijking gebruikt.
waar A een mengsel was met collagenase zonder monster; B was een mengsel zonder monster en collagenase; C was een mengsel met monster en collagenase en D was een mengsel met een monster maar zonder collagenase.
3.8.3. Remming van elastase-activiteit
Elastaseremming werd bepaald met een eerder beschreven methode [20]. N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (Suc-Ala-Ala-Ala-pNA) diende als het substraat en de afgifte van p-nitroaniline werd gevolgd voor 2{{20}} min bij 25 graden. Een portie (1 ug) type IV varkenspancreas-elastase (PPE) werd opgelost in 1 ml 0,2 M Tris-HCl-buffer (pH 8,0). reactiemengsel bevatte 0,2 M Tris-HCl-buffer (pH 8,0), 1 ppm PPE, 0,8 mM Suc-Ala-Ala-Ala-pNA, het monster en het bovengenoemde substraat. Absorptie bij 214 nm werd gemeten. Ascorbinezuur (1 mg/ml) diende als de positieve controle die ter vergelijking werd gebruikt. De remmingsverhouding werd als volgt berekend:
waarbij A een mengsel was met elastase en zonder monster; B was een mengsel zonder monster en elastase; C was een mengsel met monster en elastase, en D was een mengsel met een monster maar zonder elastase.
3.9.Statistische analyse
Gegevens worden weergegeven als de gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). De significantie van verschillen tussen groepen werd beoordeeld met behulp van meerdere vergelijkingen en variantieanalyse (ANOVA), gevolgd door de Tukey eerlijke significante verschiltest (HSD). Verschillen met p-waarden van minder dan 0,05 werden als statistisch significant beschouwd.
4. Conclusies
In deze studie werden collageenhydrolysaten, een functioneel voedselingrediënt, met succes geproduceerd door enzymatische hydrolyse, gevolgd door ultrafiltratie en zuivering. Verschillende commerciële proteasen werden getest op hun potentiële bruikbaarheid bij het vervaardigen van geschikte collageenhydrolysaten. CHS gehydrolyseerd door Alcalase was de meest effectief gehydrolyseerde CHs, en ultrafiltratie gevolgd door zuivering was effectief in het genereren van actieve peptiden met lage molecuulgewichten. De resultaten toonden aan dat de CH's uitstekende antioxiderende en collagenaseremmingsactiviteiten vertoonden. Daarom kunnen CH's die door deze studie zijn verkregen, worden gebruikt in de voedings-, cosmetica- of farmaceutische industrie als een natuurlijk additief, dat anti-oxidatieve en anti-verouderingseigenschappen bezit. Verdere studies die een in vivo evaluatie van de verouderingsactiviteiten van actieve peptiden in de menselijke huid omvatten, kunnen nuttig blijken te zijn.
Dit artikel is afkomstig uit Molecules 2019, 24, 1104; doi: 10.3390/molecules24061104 www.mdpi.com/journal/molecules
