Onderzoek naar de invloed van immuniteit bij muizen

Neem voor meer informatie contact op metdavid.wan@wecistanche.com

Twee van de dertig mannenDBA/2NCrl(D2N)muizen gebruikt als controlestam bij analyse van achtergrondgegevens vanDBA/2N-MDXmuizen, gepresenteerd met abnormale bevindingen gesuggereerd van infectie. Casus 1: Een 4-week oude mannelijke D2N-muis vertoonde een witte plaquelaesie in de linker nier (geen klinische symptomen), en er werd een pathologisch onderzoek van de nier uitgevoerd. Infiltratie van ontstekingscellen, voornamelijk neutrofielen, werd waargenomen in de tubuli en het interstitium van de linker nier, en Staphylococcus aureus (S.aureus) werd gedetecteerd in het linker niersegment. Daarom werd deze laesie aan de linker nier als etterig gediagnosticeerdtubulo-interstitialnefritis veroorzaakt door S. aureus-infectie. Geval 2: linker torticollis met gewichtsverlies werd gedetecteerd bij een 9-week oude, mannelijke D2N-muis. Histologische evaluatie onthulde exsudatieve ontsteking rond de keelholte van de buis van Eustachius, en etterende ontsteking van zowel het middenoor als het linker binnenoor met abcesvorming en clusters als grampositieve microkolonies. S. aureus werd geïdentificeerd aan de hand van uitstrijkjes van beide uitwendige gehoorgangen. Als gevolg hiervan werd dit geval van torticollis veroorzaakt door S. aureus-etterige otitis media en internet. S. aureus staat bekend als een opportunistische pathogeen met het potentieel om vaak etterende ziekten te veroorzaken bij immunocompetente laboratoriumdieren. Voor zover wij weten, is dit geval van S. aureus-infectie gepresenteerd met torticollis in een D2N-muis echter niet gerapporteerd.

Klik hier voor meer informatie over Cistanche

Een methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) isolaten ontstond in een laboratoriummuis bij het Center for Laboratory Animal Science van de National Defense Medical College in 2018 enMRSAisolaten werden daarna teruggevonden van muizen, ook in de andere muizenkamers. Op deze MRSA-isolaten werden moleculaire typering zoals Multi-locus sequentietypering (MLST), Staphylococcus aureus Protein A(spa)typering, SCCmec-typering en coagulasetypering uitgevoerd voor de bepaling van hun genotypen. Alle isolaten vertoonden identieke genotypen (ST1, spa t1784, SCCmec type IV en coagulase type VII), wat suggereert dat de isolaten identieke klonen waren. Vóór de opkomst van MRSA in 2018 waren er in deze faciliteit geen isolaten met dergelijke genotypen geïsoleerd, er werd aangenomen dat de MRSA-kloon via mens of proefdieren in de faciliteit was gebracht. STl1 is de eerste door de gemeenschap verworven MRSA die is teruggevonden bij kinderen in de Verenigde Staten, maar ST1 wordt momenteel wereldwijd bij mensen en dieren teruggevonden. In Japan zijn ST1- en SCCmec type IV-stammen geïsoleerd uit mensen en katten, wat suggereert dat ST1 wordt overgedragen tussen mens en dier. Bij mensen is een MRSA-stam met deze genotypen maar ook met spa tl784 teruggevonden. Momenteel is het onderscheid tussen in het ziekenhuis opgelopen MRSA, door de gemeenschap opgelopen MRSA en veegerelateerde MRSA onduidelijker. Deze resultaten suggereren dat muizen kunnen fungeren als reservoirs van MRSA.

Bij recente kankerimmunotherapie wordt de activiteit van moleculen zoals PD-1 geremd om de activiteit van immuuncellen tegen kanker te verhogen. Ondanks het hoge therapeutische effect zijn er gevallen waarin auto-immuunziekte zich ontwikkelt bij immunotherapie van kanker. Hier hebben we een systeem opgezet dat PD-1 op een tijdspecifieke manier kan afbreken in gekweekte cellen en muizen met behulp van deSMASH degron systeem. PD-1-SMASH-fusie-eiwit in Jurkat-cellen en CD3 plus splenocyten was verminderd met 1 dag na toediening van Asunaprevir (ASV) of Grazoprevir (GRV), die NS3/4A-proteaseremmers zijn. De groei van MC-38 adenocarcinoomcellen geïnoculeerd in PD-1-cherry-SMASh knockin(KI)-muizen met ASV werd onderdrukt in vergelijking met wildtype (WT) en onbehandelde KI-muizen. Bovendien konden de WT-muizen die waren getransplanteerd met KI-beenmergcellen na bestraling met dodelijke straling MC-38-cellen met GRV afstoten. KI-muizen leken gezond en vertoonden geen tekenen van auto-immuunziekte. We stellen voor dat het gebruik van het degron-systeem in levende organismen naar verwachting niet alleen verschillende biologische onderzoeken zal bevorderen, maar ook de behandeling van ziekten.

Progesteron (P4) wordt uitgescheiden door de placenta om de zwangerschap in stand te houden en functioneert als een immuunregulator. Glucocorticoïde is een andereimmuun-regulerendsteroïde om ontstekingen te reguleren. In deze studie werden menselijke mononucleaire cellen (PBMC's) uit perifeer bloed getransplanteerd in NOG-muizen om graft-versus-host-ziekte (GVHD) te induceren en gebruikt voor de vergelijking tussen P4- en cortisol (COR) -effecten. PBMC's werden gestimuleerd in aanwezigheid van verschillende concentraties P4 of COR en de cellen werden geanalyseerd met flowcytometrie (FCM). Hoeveelheden vanPBMC'swerden getransplanteerd in NOG-muizen en P4 of COR werd tweemaal per week in de muizen geïnjecteerd. Na 28 dagen werden FCM- en immunohistochemische analyses uitgevoerd. Dientengevolge remde een hoge concentratie P4 de activering van T-cellen in vitro, terwijl de remming niet doorging na de verwijdering. De onderdrukking van T-celactivering was minder bij COR-behandeling in vergelijking met P4, en T-celuitputting was prominenter aanwezig. P4-geïnjecteerde muizen droegen meer splenocyten, vooral CD8 T-cellen, in vergelijking met controlemuizen. Echter, de lagere expressie van CD25, minder infiltratie van menselijke T-cellen in de longen en lever, en minderGVHDsymptomen werden waargenomen. Aan de andere kant was het aantal splenocyten, vooral T-cellen, in met COR geïnjecteerde muizen significant lager en waren geactiveerde/uitgeputte cellen overvloedig aanwezig. Deze resultaten suggereren dat P4 er de voorkeur aan geeft T-cellen in vitro te behouden in vergelijking met COR.

Helicobacter hepaticus en Helicobacter rekeningen staan ​​bekend als pathogenen die hepatitis en colitis bij muizen veroorzaken. Het bestaan ​​van verschillende positieve gevallen wordt nog steeds jaarlijks bevestigd in proefdierfaciliteiten in Japan. Het is het beste om cecale inhoud of verse ontlasting te gebruiken als monster voor PCR-testen van H. hepaticus en H. bilis.

Onlangs zijn door verschillende fabrikanten DNA- en RNA-transport- en opslagreagentia vervaardigd. De verwachting is dat met deze reagentia de problemen bij het transporteren van monsters die voor PCR-tests worden gebruikt zullen worden verholpen. Daarom werd in deze studie de bruikbaarheid van het nucleïnezuuropslagreagens onderzocht door een PCR-test van Helicobacter uit te voeren met behulp van de inhoud van de blindedarm die was geconserveerd met behulp van het nucleïnezuurconserveringsreagens. Dientengevolge konden monsters die 7 dagen waren bewaard met behulp van de conserveringsoplossing Helicobacter worden gedetecteerd op hetzelfde niveau als het verse monster. Uit het bovenstaande werd gesuggereerd dat in de PCR-test van Helicobacter, zelfs als het transport dagen duurt, het mogelijk is om de test met hoge nauwkeurigheid uit te voeren door het monster ondergedompeld in het nucleïnezuuropslagreagens door gekoelde vlucht te transporteren.

We hebben eerder E.coli-mutantstammen ontwikkeld met een aanzienlijk verbeterde hechting aan in vitro vaste oppervlakken door de genen te modificeren die reageren op uithongering van voedingsstoffen. Om de interactie tussen deze door adhesie versterkte E. coli-stammen (AEE's) en in vivo intestinale omgeving te evalueren, hebben we hun kolonisatievermogen naar het darmkanaal beoordeeld door muizen te inoculeren.

Vóór het evaluatie-experiment hebben we AEE's getransformeerd met een plasmide dat luciferase tot expressie brengt voor in vivo visualisatie. zoals oraal geïnoculeerd in nuchtere muizen en om de paar dagen feces verzameld. Het aantal levendeAEE'swerd geschat door het meten van de CFU van de verzamelde ontlasting.

Als gevolg hiervan waren AEE's, vergeleken met de controlestam, meer dan een week overvloediger in de ontlasting, wat wijst op een verhoogde kolonisatie in het darmkanaal. Door de lokalisatie van luciferase-luminescentie te observeren door niet-invasieve beeldvorming met behulp van IVIS, werd ook gevonden dat AEE's de neiging hadden om te koloniseren in de blindedarm en de dikke darm.

[Doelstelling] Momenteel [Pasteurella]pneumotropeis geherclassificeerd als een nieuw geslacht Rodentibacter. Hiervan zijn R.pneumotropicus en R. Healy de belangrijkste doelwitten voor microbiologische monitoring bij knaagdieren. We hebben een aantal Rodentibacter sp. die niet als soort van knaagdieren konden worden geïdentificeerd. In deze studie onderzoeken we de kenmerken van Rodentibacter sp. isoleren, gericht op bacteriële virulentie. [Methoden] Rodentibacter sp. die was geïsoleerd uit rattenluchtpijp werden voor het onderzoek gebruikt. Draft genoomsequencing werd uitgevoerd op de next-generation sequencer en vervolgens werden de virulentie-geassocieerde genen voorspeld. In dierproeven werden Rag2-muizen gebruikt voor Rodentibacter sp. infectie.|Resultaten| Door de concept-genoomsequencing was een uniek RTX-toxine-coderend gen geïdentificeerd in Rodentibacter sp. De eiwitsequentie van RTX-toxine was meer homoloog aan die geproduceerd door Enterobacteriaceae dan door Pasteurellaceae. In een dierexperiment werd bij bijna alle geïnfecteerde Rag 2-muizen een fatale longontsteking of bloedvergiftiging vastgesteld. Hoewel het isolaat niet kon worden geïdentificeerd als R. pneumotropicus en R. heylii, kan deze nauw verwante soort dodelijk zijn voor immuungecompromitteerde dieren in aanwezigheid van virulentiefactoren zoals RTX-toxine.

In het NBRP Basic Technology Development Program (2018-2019) hebben we de genomen van murine opportunistische pathogene bacteriën gesequenced en uitgevoerdRNAseqvan protozoa in muizen, om PCR-assays voor deze organismen te ontwikkelen. We gebruikten deze resultaten om Rodentibacter spp. en protozoa bij ratten in samenwerking met de Universiteit van Kyoto (NBRP Rat). Hier rapporteren we de testresultaten in rattenmonsters. [Methoden] De 16S-rRNA-gensequenties van ongeveer 1,5 kbp werden afgelezen met PCR voor zes rattenisolaten van Rodentibacter spp. uitgevoerd op basis van RNAseq-resultaten van muizenprotozoa. [Resultaten] De 16S-rRNA-gensequenties van alle isolaten waren identiek en ze werden geïdentificeerd als Rodentibacter Ratti door OTU-analyse. Het opnieuw rangschikken van isolaat #25 onthulde ook dat deze stam R. Ratti was. PCR voor muizenprotozoa gaf positieve resultaten voor rattenamoebe. Er werden geen positieve resultaten verkregen voor TrichomonasPCRop rattenmonsters. [Discussie] De rattenisolaten van Rodentibacter spp. onderzocht in dit rapport waren allemaal R. Ratti. Het is belangrijk om op de hoogte te zijn van de aanwezigheid van R. Ratti bij het uitvoeren van Rodentibacter-tests bij ratten. Sommige fecale monsters van ratten toonden positief voor muis-amoebe-PCR. Dit is de eerste stap in de ontwikkeling van PCR voor de detectie van protozoa bij ratten.

Rodentibacter-organismen 'Pasteurella pneumotropica' zijn opportunistisch pathogene bacteriën die luchtwegaandoeningen veroorzaken bij muizen en ratten. Ze werden vroeger ingedeeld in het geslacht Pasteurella en verschillende stammen werden voorlopig voorgesteld als biotypes. In 2017 werden ze collectief gereorganiseerd in het geslacht Rodentibacter. MaM- en MaR-stammen werden rond de jaren tachtig geïsoleerd uit respectievelijk muizen en ratten. In deze studie hebben we de genoomsequenties van beide stammen bepaald en vergeleken met die van het geslacht Rodentibacter, materialen en methoden De MaM- en MaR-stammen werden verkregen van het National Institute of Infectious Diseases (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Beide stammen werden gekweekt door vloeibare kweek om genomisch DNA te extraheren, en de genomische sequenties werden bepaald met behulp van Illumina Hiseq 2500 en PacBio Sequel. [Resultaten] Op basis van de 16S rRNA-gensequentie werd de MaM-stam geïdentificeerd als R.pneumotropicus en de MaR-stam als R. Ratti. Verder werd de volledige genoomsequentie (2.213.961 bp) van de MaR-stam bepaald (het aantal rRNA-operons was 6 en het aantal genen werd geschat op 2.063). [Discussiel De MaM- en MaR-stammen zijn gebruikt als standaard voor het identificeren van 'Pasteurella pneumotropica' in Japan. Uit deze analyse hebben we de soort van beide stammen als volgt bepaald: de MaM-stam is R.pneumotropicus en de MaR-stam is R.ratti. Opmerkelijk is dat deze resultaten laten zien dat R. Ratti kan worden geïsoleerd uit ratten in Japan.

Clostridium pili for me (CP) is vatbaar voor infectie bij verschillende laboratoriumdieren, waaronder ratten en muizen, en vertoont een asymptomatische infectie, behalve bij immuungecompromitteerde dieren. Het wordt beschouwd als een belangrijke differentiële diagnose om dierfaciliteiten in stand te houden en het is bekend dat het de experimentele gegevens van dierstudies beïnvloedt. Serodiagnose (ELISA, IFA) en PCR worden vaak gebruikt voor de diagnose van CP omdat de isolatie in de kunstmatige voedingsbodem voor CP moeilijk is. Het bestaan ​​van het niet-specifieke antilichaam dat de kruisreactiviteit met CP aangeeft met behulp van de serodiagnose, wordt echter gerapporteerd en wordt in onze faciliteiten vaak herkend in een soortgelijk geval. Bovendien heeft de PCR-methode grenzen als betrouwbare diagnostische methode met periodieke monitoring, omdat CP niet detecteerbaar is in feces na de stijgende antilichaamtiter. Onlangs hebben we een andere aanpak onderzocht, waarbij we elke maand uitwerpselen van dieren bewaren. We hebben de PCR-test voor CP aangenomen die niet wordt beïnvloed door de invloed van de antilichamen als betrouwbaardere diagnostiek waarbij de ontlasting continu wordt bewaard. In dit rapport laten we een recent voorbeeld zien. (niet-specifiek antilichaam) om te leiden tot inspectie van de stroom die zich in ons bedrijf ontwikkelt.